PCR过程中出现问题，不能得到扩增结果

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• fjdlgldg (2009-1-06 22:47:28)

  提高变性温度和时间，提高退火温度
  
  还有用降落PCR
  
  实在不行，加5%(剂量需要摸，以1%为梯度，但一般很少用到15%)左右的DMSO

• ttkl533 (2009-1-07 22:43:50)

  感谢关注和帮助。
  
  我在多次PCR尝试过程中也应用了很多不同的条件(变性温度和时间相应提高、退火温度也试了很多，体系中各成分含量也相应调整过)但是从来都没有出现过我的目的条带。(是一点都没有)
  
  您建议的降落PCR，我没有试过，以前也没有接触过，我了解后尝试一下。
  
  另外，DMSO应用在我的PCR中作用是什么呢?我只知道它与GC含量有点关系。
  
  再次表示感谢!

• ngoir (2009-1-08 22:49:26)

  DMSO应用在我的PCR中作用是什么呢?
  
  可以提高pcr扩增条带的特异性(效率和专一性)，扩增一些比较难扩增的模板，一般常用的浓度为2~10%，当DNA 片段模板的GC 含量太高时，DMSO 可以改变引物DNA 模板杂交(Hybridization)的温度(Tm)。但是，过量的dmso也可以抑制模板的扩增，主要是抑制聚合酶的活性，所以，用之前需要小量摸索。