细胞培养的条件也很重要

细胞培养在生物实验室可以说跟吃饭一样经常，也经常会出现一些问题，比如污染等。常见的问题，如微生物污染，细胞交叉污染等只要操作时多小心一些就会尽量避免。我之前在看文献时想到了一个更隐蔽的问题，那就是细胞的培养条件也会影响细胞的生长状态，而且也有可能影响到最后的实验结果。

    真核细胞都存在一个保守的机制：应激反应（Cell Stress Response），这个信号通路能激活HSF1等转录因子，而它们能够活化细胞多耐药蛋白（multi-drug resistance gene，MDR1）的表达，，MDR1可以通过水解ATP把细胞内的小分子化合物排出细胞。因此，如果不小心诱导细胞产生了应激反应，极有可能会导致MDR1的表达，使得一些细胞实验的结果不能重复出来。

    这个问题是我之前的一次实验失误无意间发现的。那次实验结果细胞给药之后凋亡率明显降低了，而当时我们所用的细胞培养箱温度不太稳定，怀疑有上升的可能，我意识到有可能这些会引起细胞的应激反应，而这会不会造成细胞产生耐药问题呢？我找到相关文献，答案是肯定的，又找到一个师兄了解了这方面的基本知识，他也同意我的判断。就经过这个事情，我才意识到，细胞培养的条件稳定是非常重要的。

    细胞培养过程中可能引起应急反应的因素我总结有这么几种：1. 温度变化；当温度高于42度半小时以上就能诱导应激反应（他们研究应急反应的用的用的是这个条件，估计不用这么高就可能会有应激反应）。2. 营养缺乏；培养环境营养缺乏（换培养基太懒）或者细胞因子缺乏都有诱导应急反应的可能。3. 重金属或者其他小分子化合物刺激也能诱导应激反应。4. 氧自由基；细胞间以及超净工作台经常用紫外线杀菌，而这会产生臭氧和其他氧自由基，而如果在没有彻底吹干净的时候把细胞放到这种环境里面就会使培养集中产生过氧化氢等活性氧，浓度达到一定程度就能诱导细胞应激反应。5. 微生物污染；细菌、病毒、真菌、酵母、支原体污染等均有可能引起细胞应激反应，不过大部分情况都会及时处理，不会对实验结果有多少影响。

    因此，培养细胞的时候除了要格外小心，防止微生物污染和细胞交叉污染之外，还应该多留意细胞培养条件的变化，培养基更换不能太懒，也不能太勤（容易造成细胞因子的缺乏），细胞间和超净工作台杀菌之后多吹一段时间，让臭氧发散干净。这些都是培养细胞过程中容易忽视的细节。还有，细胞复苏后培养的时间也不能太久。最好过一段时间再重新复苏一批，这样才能尽可能避免应激反应给实验带来的干扰。

    这都是我一家之言，如果你觉得有什么不对的地方或者需要补充的欢迎留言。
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