关于细胞分离和ELISA

最新回复

• ngoir (2009-1-23 21:45:53)

  1.抽取正常人静脉血加到肝素抗凝管中，加等量含5～10IU/ml肝素的无血清缓冲液悬浮细胞。将细胞悬液小心加在与血液等量的淋巴细胞分离液上，室温中，水平离心 500×g 20分钟。此时离心管中形成5层：最上面是血浆，血浆层和淋巴细胞分离液之间是PBMC，淋巴细胞分离液层和最下面的红细胞层之间是粒细胞层，又成为棕黃层。
  
  2.吸去最上层的血浆，收集血浆层和淋巴细胞分离液交界面的单个核细胞，尽量全部吸出PBMC。加1～2倍量含5IU/ml肝素、2%灭活小牛血清的Hanks液(洗涤液)，混匀后离心200×g 10分钟，低速离心有利于去除细胞悬液中留存的血小板，去上清液。
  
  3.再用同样洗涤液洗涤细胞2次，每次离心500×g 10分钟，洗去残留的淋巴细胞分离液。用1%台盼蓝染色检测细胞活力(应>95%)并计数细胞。再用含10%小牛血清的细胞培养液将细胞配成适当浓度。通常，每毫升外周血可得1×106～2×106PBMC。
  
  另外，分离后的血清层可以做ELISA。但是由于此血清已被稀释，所以当用来做微量抗原分析时，可能ELISA的灵敏度达不到要求，这点要注意。