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溶血性链球菌的检验（一）
关键词：食品成分分析标准物质 环境化学分析标准物质 进口标准品 药品对照品溶血性链球菌的检验（一）
引起食物中毒的是甲型链球菌，该菌产生溶血素等外毒素，人体摄人大量活菌可引起感染型食物中毒。主要症状为腹泻、腹痛、恶心、呕吐等急性胃肠炎。加热至60℃、30～60 min可杀死该细菌。人和动物的带菌者常为污染的主要源。
1．常规培养法检验与鉴定
随机取样1～2 g(mL)，接种于葡萄糖或血清肉汤增菌培养基内，37℃培养24～48 h，如果样品污染严重，可接种于匹克增菌培养基内，37℃培养24～48℃h。如有菌生长可进行涂片，革兰氏染色和镜检，在视野中发现有革兰氏阳性球菌，便可进行分离培养和细菌鉴定：取一接种环的菌液，划线于2～4份血液琼脂平板上，分别使用需氧和厌氧培养，于37℃下经18～24 h后，链球菌形成的菌落细小、圆形、突起、灰白色、半透明、表面光滑，在菌落周围发生约1 mm宽，绿褐色的环便是a型溶血。如发生2～4 mm宽、界限分明、无色透明的溶血圈，便是口型溶血。若菌落周围不发生溶血圈，便是y型溶血或-1做不溶血。然后再涂片染色镜检，若为革兰氏阳性球菌并呈链状排列时，再转接于血液琼脂平板上进行纯种分离。经分纯后，若为溶血菌落，但其镜检形态不典型而呈双球菌状态时，应进行肉汤培养，菊糖发酵胆汁溶菌试验，以便作肺炎链球菌的鉴别，还要进行生化反应和血清学鉴定。
2．生化反应试验
生化反应可将几种主要病原性链球菌加以区别、鉴定。
①a型溶血性链球菌与肺炎链球菌的生化鉴别
a．胆汁溶菌试验：取已培养18～24 h的待检菌株液体培养液试管2支，每支约4 mL，向其中一管加入1 mL无菌胆汁，在37℃下60 min后比较两管的浓度，若为a型溶血链球菌，则应变为混浊，若肺炎链球菌，则变为澄清。
b．菊糖发酵试验：肺炎链球菌可以分解菊糖，而a型链球菌则为阴性。
②肠道链球菌与其他链球菌的生化鉴别
a．生长试验：将待检菌株接种于6．5％的氯化钠葡萄糖肉汤、pH9．6葡萄糖肉汤、0．1％的美蓝牛乳和40 %胆汁葡萄糖肉汤培养基内，37℃培养箱内培养，肠道链球菌均能生长。
b．耐热试验：将待检菌株接种于0．5％的葡萄糖肉汤，在60℃水浴中经30 min加热处理后，再放入37℃培养箱内培养，肠道链球菌仍有活力。
c．培育试验：将待检菌株接种于0．5％的葡萄糖肉汤2支，分别放于10℃和45℃下培养24 h后观察，肠道链球菌均应发育生长。
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