【求助】我现在想做下湖水样品细菌计数

最新回复

• huali (2015-7-14 14:22:34)

  要是方便的话，感觉平板计数较好些，应为计数器来没那么多麻烦，要是条件允许的话，其他方法也可以！

• yuanyuan (2015-7-14 14:23:05)

  湖水样品，最好是DAPI 和 FC。 平板太不靠谱，很多unculturable的

• rrra6 (2015-7-14 14:23:35)

  我用了dapi在400倍下计数，细菌是不是特别小，一个小点？

• malong (2015-7-14 14:24:02)

  40倍吧， 40倍下 差不多 就是一粒沙那么大那么大

• mimima (2015-7-14 14:24:32)

  物镜40倍， 目镜10倍。嗯，我计数的是沙粒大小的。，谢了啊

• PP熊 (2015-7-14 14:25:02)

  看了个文献说显微镜计数比较好。流式细胞仪也不错，其他方法不推荐。

• yuanyuan (2015-7-14 14:25:37)

  但是 细胞和细菌一起，怎么计数好呢？好纠结。。。

• p1900 (2015-7-14 14:26:10)

  你有DAPI具体的方法吗？能给我一下吗？

• 886爱 (2015-7-14 14:26:42)

  细菌显微镜计数方法
  1、        取1 ml样品，超声40 s，低功率，0.2 cycle/second。
  2、        加200 微升，100 微克/ml DAPI，暗处染色5 min。
  3、        用0.22 微米，黑色聚碳酸酯膜过滤收集，然后用无菌水冲洗两次。
  4、        加一滴荧光显微镜油于载玻片上，贴上载菌体的滤膜，再向滤膜加一滴油，盖上盖玻片（滤膜两面均不能有气泡）。
  5、        在荧光显微镜365 nm处观察，DNA为亮蓝色，非DNA为黄色。
  6、        数10个视野，每个视野约20个。
  N=X*Na*S/(St*V)
  N：样品含菌数，个/ml
  Na：各视野平均菌数，个
  X：样品稀释倍数
  S：滤膜滤水面积，cm2
  St：视野面积，cm2
  V：过滤样品量，ml

• xiaoxiaoai (2015-7-14 14:27:19)

  根据文献的参考标准计数，一般是高倍镜下（x400）或（x200）随机选取几个视野，计数一定量的细胞，争取做到能反映切片的全貌；也有专门的计数软件，需要先选取视野摄像，然后通过软件处理。
  视野面积==显微镜目镜的视场数 / 物镜的放大倍数，
  例如OLYMPUS的目镜的视场数为22，那么10X物镜下的视野面积为直径为
  2.2mm。
  而20X的视野面积为1.1mm

• 蓝色雨梦 (2015-7-14 14:27:55)

  样品要怎么处理啊？直接用采的水吗？我的水样有其他的藻类会干扰吗？

• wwwh (2015-7-14 14:28:37)

  平板计数是最有效的方法，操作简单，就是会花点时间。其他两种方法会存在很大的误差，而且要求比较高

• 兔子 (2015-7-14 14:29:15)

  藻类有多大？大的没关系吧，超微型我不太清楚.不知道有没有人做过类似的验证实验