求助：PCR产物直接酶切后如何看到比较小的目的片段？

最新回复

• 嗡嗡 (2011-8-15 16:05:16)

  你好 我也在做你类似的实验 请问你的酶切体系是怎么加的啊 我的是 pcr产物6ul 10*buffer 2ul MavI 1ul 加ddH2o 水20ul 37°c 水浴过夜16小时 但是看不到酶切产物啊 我的胶是0.6%琼脂电泳

• 嗡嗡 (2011-8-15 16:05:56)

  QUOTE:

  原帖由 嗡嗡 于 2011-8-15 16:05 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  你好 我也在做你类似的实验 请问你的酶切体系是怎么加的啊 我的是 pcr产物6ul 10*buffer 2ul MavI 1ul 加ddH2o 水20ul 37°c 水浴过夜16小时 但是看不到酶切产物啊 我的胶是0.6%琼脂电泳 ...

  那看到没切动的PCR产物了吗？

• 嗡嗡 (2011-8-15 16:06:31)

  小片段电泳应该很容易分开，3％的浓度没有必要。50bp的带浓度和150bp是一样的，只不过片段小结合的溴化乙锭分子少，加上电泳时间长后小片段很容易弥散开来，就很难在胶上显示。
  建议你胶浓度1.5％到2%，跑到loading dye 到胶的一半就观察。如果EB加在胶里，浓度可以适当高一些，如果跑完后再染色时间可以长一些。

• 嗡嗡 (2011-8-15 16:06:57)

  请问那个胶浓度太大对跑胶有什么影响吗？

• 嗡嗡 (2011-8-15 16:07:25)

  不同浓度分辨的片段大小不同
  搞浓度适合片段较小的，一般来说2.0%胶浓度最佳分辨范围是50bp-2000bp。

• 嗡嗡 (2011-8-15 16:07:43)

  不同浓度分辨的片段大小不同
  搞浓度适合片段较小的，一般来说2.0%胶浓度最佳分辨范围是50bp-2000bp。
  
  如上所说有没有具体一点的数据比例呀？

• 嗡嗡 (2011-8-15 16:08:04)

  你说的”如果EB加在胶里，浓度可以适当高一些“是指胶的浓度吗，

• 嗡嗡 (2011-8-15 16:08:34)

  你有照片吗？如果本身你的两个较大的片段就很淡那你想看到那个54bp的就不大容易。尽可能的增加你酶切的pcr产物的量罢