请教：ＲＮＡ提取和ＲＴ－ＰＣＲ试验前的准备

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• 不懂 (2011-8-16 15:45:14)

  depc水37度过夜以后要长时间灭菌的，如果你的塑料桶可以灭菌就没问题，枪头ep管子常规灭一下就可以了。RT对RNA质量的要求不算高，比起northern要地多了

• 不懂 (2011-8-16 15:45:31)

  DEPC水用棕色瓶装比较好（一般实验室应该都有的）
  枪头各种规格都要准备（1ml在抽取RNA时用较多，小枪头在后面的过程用得较多）
  EP管1.5ml和0.5ml等都要准备

• 不懂 (2011-8-16 15:45:49)

  如果是提取组织RNA，最好对剪刀，镊子等器具也一并用DEPC水浸泡处理，（如果要电泳看RNA完整性的话，电泳槽也处理一下）将你的塑料桶放在摇床上摇匀，我的建议为保险起见，还是应该把EP管、枪头用DEPC水处理一下。

• 不懂 (2011-8-16 15:46:21)

  归根究底，RNA工作的主要问题是防止RNA酶的污染。避免任何可能的污染是保证实验成功的关键，必须做到以下几点：
  
  1。操作过程中应自始至终佩戴抛弃式橡胶或乳胶手套，并经常更换，以避免将手、臂上的细菌和真菌以及人体自身分泌的RNA酶带入试管或污染用具。
  2。尽量使用一次性枪头、离心管等塑料制品，尽量避免与其它实验共享器具，以防止交叉污染。0。1%的DEPC水浸泡过夜，然后灭菌，烘干，备用。DEPC毒性很强，操作中要注意。
  3。配制溶液用的酒精，异丙醇、Tris等应采用未开封的新品。溶液需用DEPC水配制（加0.01%(体积比)DEPC至重蒸水或Mili Q级水中，处理过夜，灭菌即成DEPC水）。
  4。所有玻璃制品都必须在240℃烘烤4小时。所有旧塑料制品都必须用0.5M的NaOH处理10分钟，并用DEPC-H2O彻底冲洗后灭菌，也可考虑用0.01%的DEPC水浸泡过夜，然后灭菌，烘干。无法用DEPC处理的用具可以用氯仿擦拭若干次，这样通常可以消除RNA酶的活性。

• 不懂 (2011-8-16 15:46:37)

  剪刀镊子不用处理

• 不懂 (2011-8-16 15:52:13)

  TIP头1000 200 10UL的都会用到，相比来说，抽RNA时用tip不多，你可以直接买AXYGEN的，他们的都是无酶无菌的，有盒装有袋装，如果你用袋装，最好准备铝盒，然后干烤至少8小时，然后用来装tip,1.5ML的管子。
  
  DEPC水用棕色玻璃瓶子装，因为要灭菌，塑料瓶子一般受不了高温高压
  
  后期做REAL TIME 时会用到很多10UL的tip