请问做pcr的模板DNA用什么稀释要好些，TE 还是ddH2O?

最新回复

• 冷太阳 (2011-8-22 14:55:54)

  这个。。。我实验室里的模版DNA有人用TE稀释，也有人用双蒸水稀释，没有见到谁的PCR产物有明显的差别。只不过TE难得配，所以大多数人都用双蒸水；但是近期由于冻存的双蒸水用完了，所以大家开始用TE。。。还有人用试剂盒里提供的DNA溶解缓冲液，似乎都没什么影响。

• 冷太阳 (2011-8-22 14:56:33)

  一般来说还是ddH2O比较好，TE buffer 中含有EDTA，会螯合PCR体系里边的镁离子，对PCR有影响！！！

• 冷太阳 (2011-8-22 14:57:08)

  谢谢回复！
  
  但是配TE的时候一般用的都是EDTA.Na2，应该对镁离子影响不大吧？

• 冷太阳 (2011-8-22 14:57:45)

  强烈建议用TE去溶解稀释DNA模板！！！ddH2O去溶的话不利于DNA的保存，反复冻溶和保存时间稍微长一些的话，DNA就会降解的很厉害，尤其在DNA浓度不是很高的情况下。而TE溶液中保存的话，则可以大大的缓解这种情况。至于，EDTA螯合PCR体系里边的镁离子的问题，完全可以忽略，或者稍微提高镁离子的使用终浓度来解决。我做的100ul体系里面加入10ul的模板，也没有看到对PCR产物的产量有什么影响。一家之言，仅供参考。

• 冷太阳 (2011-8-22 14:58:06)

  而且我听说用TE溶解的话ph值更稳定，更有利于pcr扩增。

• 冷太阳 (2011-8-22 14:58:36)

  如果短期，还是DD水方便，但是要长期保存TE更好！它的PH值更利于DNA不降解

• 冷太阳 (2011-8-22 14:59:11)

  楼主，你好
  TE buffer 是Tris碱和EDTA配成的缓冲夜，实验室融解DNA用的一般为PH8.0的，关于你的问题我的看法如下：
  1：你提出的DNA如果是PCR用，TE或ddH2O融解，对PCR基本上没有影响
  2：如果你提出的DNA是用来酶切的，尽量用ddH2O,因为EDTA对有些酶有抑制作用
  3，如果提出的DNA需要长期保存，一定用TE来融解，可避免反复冻融，延长DNA的使
  用寿命

• 冷太阳 (2011-8-22 15:00:36)

  楼上的分析的很好！
  
  虽然只是个小问题，很容易忽视，反正我是拿不太准。
  
  我是新手，多谢指教！

• 冷太阳 (2011-8-22 15:01:23)

  用5mM的Tris行么？真的没认用过