pcr产物纯化步骤---加入了细节和体会

字体: 小中大 | 打印发表于: 2011-8-23 15:06 作者: =菓子= 来源: 分析测试百科网

pcr产物纯化步骤---加入了细节和体会 [转自丁香园论坛]

在下第一次专业贴，请尊敬的斑竹及各位通道指教。
原创声明：由于个人觉得pcr纯化试剂盒的说明个别地方不够详细，同时也向同实验室的师姐请教了些心得，把本人最近做完纯化实验后的体会与大家分享，希望能让将来有此需要的人得到简单的帮助。。。。。。。。。。。。。如有雷同，实属巧合，谢谢
PCR产物纯化步骤（biomega纯化试剂盒）
1、准备与纯化样品个数相同的德ep管（大），分别标记
2、向每个管中加入50X5ul的GC buffer （片段小于200bp的GC：pcrDNA=5:1 大于200bp的病例为2：1）
3、将pcr产物（50ul）全部吸出加入到相对应的ep管中，混匀后涡旋离心
4、准备好离心柱（分为两部分，请做好双重标记）
5、将混匀的液体加入到离心柱中。离心 13000g，1min
6、将柱子取出，倒掉管中液体，再套回柱子备用（产物中的DNA此时全部附于离心柱的过滤筛上）
7、向每个管中加入500ul wash buffer，放入离心机，13000g，1min后重复步骤6.
8、再向管中加入500ul wash buffer，放入离心机，13000g，1min后重复步骤6.
9、将离心柱的盖子打开（让wash buffer中的酒精挥发）和套管一起放入离心机，16000g，4min（去除干净wash buffer）
10、准备要用来收集纯化样品的ep管（大），对应标记。
11、将离心柱的管芯取出，套入相应的ep管，向离心柱中心的白膜（过滤筛）上滴加30ul的灭菌纯水or Elution buffer,室温放置3min（让DNA溶解于溶液中，便于洗脱）
11、将离心柱盖好，连同ep管一同放入离心机（此时ep管的管是打开的），13000g，1min。
12、取出整个套管，打开离心柱盖子，向中心虑筛处滴加20ul灭菌纯水or Elution buffer后室温放置3min，重复11步骤。
13、取出套管，此时大ep管中应当收集了50ul的纯化DNA产物，丢弃柱子，4°保存DNA样本备用。
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