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梯度洗脱需要注意到问题
梯度洗脱，是分离难分离物质的常用手段—-这句话怎么这么难听?其中有些问题是必须要注意到，因为会损伤色谱柱和色谱的流动池或检测池，这都是色谱仪器的死穴。有些资料整理自网络，有些事工作的总结，我也分不清彼此，属于水乳交融你中有我我中有你的情况。梯度洗脱需要注意到问题
1、何为空白梯度洗脱
梯度洗脱由于是两种流动相随时间变化，即使在优秀的分析匠、在性能卓越的色谱仪都不可能出现非常好的基线，这就要求做空白梯度洗脱。啥叫空白?不用我告诉你吧，而取巧的办法是进一针流动相，看看基线中的杂峰。不要像某些人一样，看到峰就故作明白的说：“呀!鬼峰”经常有这类SB在我身边晃来晃去，然后你要接着问要探讨一下的时候，就以沉默对抗无知。我虽然没查过鬼峰的概念，但是也知道，莫名其妙、偶尔出现、具有鬼的特点的峰，才能叫鬼峰，基线上的峰你鬼峰个头啊!
2、要注意溶剂的互溶性
这是大家经常忽略的问题，而这个问题的严重性还很高，严重了直接把色谱柱给你堵了。到时候那真就叫天天不应，叫地地不灵了。比如说有些溶剂在一定的比例内互溶，超出一定的范围后就不会互溶。例如：乙腈和1mol/L的醋酸铵(pH5.16)做梯度洗脱，乙腈含量超过70%时就会出现不溶，甲醇和已烷混合，甲醇含量高于30%时就会分层等。当有机溶剂和缓冲溶液混合时还可能析出盐的结晶体，尤其使用磷酸盐时需特别小心。所以，掌握，做梯度洗脱先要了解流动相当互溶性，如果使用比例互溶的流动相，就更应该注意这个问题，不要自作主张胡乱更换流动相当比例。没准你轻轻鼠标一点，就结束色谱柱的大好钱途呢。
3、试剂的纯度
梯度洗脱要想保证好的重现性，溶剂的纯度要求更高，脱气在这里也成为了必须保质保量完成的任务，因为有些溶剂互溶的时候，脱气不好会产生气泡。
4、试剂的黏度
做梯度洗脱的同志，会发现压力波动范围变大，不要大惊小怪，由于溶剂黏度不同，当变化较快的时候，肯定会出现压力波动现象。比如用醋酸溶液和乙腈作为流动相，由于乙腈的黏度小于醋酸溶液，因此当乙腈比例提高时，压力会下降。还有个例子，纯水或甲醇的粘度都比较小，但是当二者以相近的比例混合时粘度会增大很多，此时的柱压是纯水或甲醇为流动相时的两倍。当然，不要让柱压超过输液泵或色谱柱所能承受的最大压力。
5、色谱柱再生
再生这个词用在这里似乎有些不妥，准确的说法是使色谱柱恢复到初始的状态。需让10～30倍柱容积的初始流动相流经色谱柱，使固定相与初始流动相达到完全平衡!
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baikk (2011-8-31 11:10:25)
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