细胞RNA的提取（图文）

字体: 小中大 | 打印发表于: 2011-9-05 14:56 作者: 庄梦蝶来源: 分析测试百科网

细胞RNA的提取（图文）

本人提取细胞RNA的过程和照片，给初学者，呵呵，贻笑大方。

1、冰冷的PBS液 5-10ml洗涤细胞两次，加入Trizol 1ml，混匀，室温静置15min；这是加入Trizol以后的照片。

[ 本帖最后由 miracle 于 2011-9-5 15:24 编辑 ]

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细胞RNA的提取（图文）

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庄梦蝶 (2011-9-05 14:57:33)

２、小滴管吹打，使细胞完全裂解，然后完全转移至1.5ml EP管内。

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庄梦蝶 (2011-9-05 14:58:08)

3、加入0.2ml的氯仿，剧烈震荡混匀30s。有人喜欢室温静置10min，有人直接去离心也没问题。偶愿意室温静置10min，看自动分层了，上层水相，下层为酚相。

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庄梦蝶 (2011-9-05 14:58:45)

4、4度离心，15000rpm，15min，看看中间白的是蛋白层，上层为水相。（最上有点红，那是反射光，呵呵）

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庄梦蝶 (2011-9-05 14:59:22)

5、将上层水相移至另一EP管内，400-500ul，不要贪多，小心切勿吸到蛋白，加入等量的异丙醇，充分混匀，室温静置10min。然后4度，15000rpm，离心10min，然后管底可以看到RNA噢！看看图，我加了个圈。

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庄梦蝶 (2011-9-05 15:00:44)

6、弃掉上清，加入冰冷的75%乙醇漂洗两次，用移液器将液体吸干，室温干燥10-20分钟，待产物呈半透明状，加入20ul DEPC处理过的水溶解RNA，你就可以用了。图就不贴了。

提RNA所用试验物品均需经0.1%DEPC水处理后消毒、烤干。所需试剂如75%乙醇需用无水乙醇加灭菌的DEPC水配制，为保证RNA提取过程中，RNA不被空气中RNA酶降解，应勤换手套，戴口罩，这是常识哦。
finger (2011-9-05 15:01:45)

用移液器将液体吸干，室温干燥10-20分钟，待产物呈半透明状，加入20ul DEPC处理过的水溶解RNA，你就可以用了

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呵呵，不错，非常直观！

补充一点：移液器将液体吸干后，干燥时间一般10分钟左右即可，干燥时间过长会导致RNA很难溶解。

另：如davidbgb战友所提取的RNA量，最好加入10～20ul RNase Free 水（DEPC处理过的水，也可用高压处理过的双蒸水），以免RNA浓度过低，影响以后的扩增效率。

个人意见，仅供参考！
丁香@@ (2011-9-05 15:02:21)

太好了,谢谢,很直观，第一次这么直观看到！
wawa (2011-9-05 15:02:48)

请教一下，如果我要提取脑组织海马区的RNA，方法和上面的一样吗，我要做脑缺血后脑组织蛋白的RT-PCR，谢谢楼上，能指教一下吗。
Darcy (2011-9-05 15:03:51)

我一直在克隆一个基因
提RNA
DNA酶消化
RT－PCR
P内参
P基因

可是几个月过去了，我还是没有P出来，我的RNA提的很好，内参也P出来了，就是自己的基因P不出来，引物是文献上的别人都P出来的。
很郁闷！