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醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白质（四）
关键词：浊度标准物质 食品检测 农药多残留分析 环境监测标准样品醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白质（四）
【临床意义】
正常血清蛋白电泳一般可分为5条区带，即Alb、α1、α2、β和γ-球蛋白。脐带血清、胎儿血清、部分原发性肝癌血清，在Alb与α1-球蛋白之间可增加一条甲胎蛋白带。多发性骨髓瘤可分离出6条区带，多出的1条称为M蛋白带。在下列疾病中可见醋纤膜蛋白电泳图明显异常。
1．M蛋白血症 单克隆γ球蛋白(M蛋白)血症，主要见于多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、重链病以及一些良性M蛋白增多症。在β与γ-球蛋白后区段的各部分出现一条致密浓集的M蛋白带。
2．蛋白缺乏症 主要包括α1-抗胰蛋白酶缺乏症、γ-球蛋白缺乏症等。临床上较少见。电泳图形表现为α1或γ球蛋白部位蛋白缺乏或显著降低。
3．肾病见于急慢性肾炎、肾病综合征、肾功能衰竭等。表现为A1b降低，α2和β-球蛋白升高。
4．急慢性炎症 表现为α1、α2和β三种球蛋白均增高。
5．肝病包括急慢性肝炎和肝硬化。主要表现为Alb降低，β和γ-球蛋白增高，出现β和γ难分离而相连的“β-γ桥”，此现象往往是由于IgA增高所致，IgA与肝脏纤维化有关。
【注意事项】
1．通电时，不得接触槽内缓冲液或CAM，以防触电。
2．CAM在电泳前，必须浸泡在巴比妥缓冲液中，使薄膜浸泡透彻。
3．缓冲液液面要保证一定高度，同时电泳槽两侧的液面应保持同一水平，否则通过薄膜时有虹吸现象，会影响蛋白质分子的泳动速度。
4．电泳常见的缓冲液为巴比妥缓冲液，用硼砂、Tris和EDTA组成的缓冲液可以分离出前白蛋白，三种α-球蛋白，三种β-球蛋白和γ-球蛋白。
5．电泳后区带应无拖尾，各区带明显分开，如果电泳图谱分离不清或不整齐，最常见的原因有：①点样过多；②点样不均匀、不整齐，样品触及薄膜边缘；⑧薄膜过湿，样品扩散；④薄膜未完全浸透或温度过高导致局部干燥或水分蒸发；⑤薄膜与滤纸桥接触不良；⑥薄膜位置歪斜、弯曲，与电流方向不平行；⑦缓冲液变质；⑧样品不新鲜；⑨CAM质量不高等。
6．染料问题 染料的选择应对蛋白质的各组分亲和力相同，吸光度与蛋白质的浓度成正比。并要求水溶性好、染料稳定、吸光度敏感，形成的染料蛋白质复合物稳定且易洗脱比色。用光密度计扫描定量一般用丽春红S染色，比色法定量既可用丽春红S也可用氨基黑10B染色。在血清蛋白正常浓度范围内，丽春红S能与各蛋白质组分成正比例结合，而氨基黑10B却对白蛋白染色过深，导致白蛋白结果偏高，球蛋白偏低。
7．血清加量标本应新鲜，不得溶血。如为扫描法，丽春红S染色加入血清量在0．5～1．0µl/cm，氨基黑10B染色加1～1．5µl/cm。如血清总蛋白含量超过80g/了，用氨基黑10B染色时应将血清稀释2倍后加样。若不稀释，白蛋白中蛋白含量太高，区带染色不透，反而出现空泡，甚至蛋白膜脱落在染色液中，致使定量不准确。
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