【求助】不解的CCK8结果

最新回复

• ns5fan (2015-9-10 16:14:27)

  你为啥不能延长时间呢

• 鸽子不哭 (2015-9-10 16:14:50)

  QUOTE:

  原帖由 ns5fan 于 2015-9-10 16:14 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  你为啥不能延长时间呢

  考虑以前结果不理想的原因是否与细胞加药前培养时间长短有关，所以尝试一下加药后24小时，应该是相关的。又铺了两块儿板，等待结果，继续摸索。

• youyou99 (2015-9-10 16:15:10)

  
  我做MTT也会出现负值。
  你做CCK8应该先预实验，在加CCK8后半个小时到四个小时内的这段时间内多测试几个时间，找出趋势最好的时间后，以后就用这个时间。

• yizhi (2015-9-10 16:15:28)

  
  如何分析趋势是否是最好的时间呢？我发现孵育时间越长，0D值越大，四小时时可以达到2以上，这个是机器原始值

• am10 (2015-9-10 16:15:43)

  
  唉，同疑问啊。我做的时候也是会出现2以上甚至3的数值，但有些又是负值。

• rfv (2015-9-10 16:17:38)

  哎 我也是 达到2甚至3，负值倒是没出现

• DCS (2015-9-10 16:19:05)

  
  OD值高应该是和细胞数有关系的吧，CCK8的说明书上检测的细胞数是10000个细胞，不知大家每孔细胞数都是多少，我是10的5次方，淋巴细胞，4小时以后的值也没有超过2，出现负值可能跟酶标仪有关吧，我在蛋白定量时会出现负值，有时是因为浓度太低了，有时是不明原因的，CCK8还没有出现过

• youyou99 (2015-9-10 16:19:26)

  
  我测试mtt也有负值

• mickeylin (2015-9-10 16:20:29)

  
  一般CCK8做细胞毒性分析，是每孔约5000个细胞，液体量100μl，培养24小时后，加处理因素，然后再培养48小时，加CCK8后，在孵箱内培养1-4小时,450nm测OD，650nm做参考波长。
  但是这只是参考。
  "几乎各浓度梯度药物复孔都有1-2个孔吸光度出现负值"
  1、药物处理时间上，如果你搞不清楚毒性作用有多大，你想探究一下原因，可以用24h，36h，48h做三块板子；
  2、当然前一条有些很浪费试剂，
  从理论上说，要将值提高，可以增加种板细胞数，也可以延长cck-8作用时间；
  你可以将种板数增加到10000，甚至50000都可以试试，另外你也可以加了cck-8后从1h时起，每半个小时测一次，最后来分析一下数据和原因
  3、其他因素
  关于机器
  个人经验，建议开机半小时以后再测，数据相对稳定一些。
  关于板子
  把板子表面擦干净，从贴壁的24小时，折腾到处理48小后，常看到有的板子外面附的有干的培养基，有的板子在孔与孔之间的缝隙里都加得有液体。Big Smile

• 8964357 (2015-9-10 16:21:09)

  所谓的负值，是不是用读出的数值减去试剂对照得出的呢？好像我的也有负值呢，如果细胞数目少的话，就会有负值，多的话OD值又会超过2，怎么应对这个问题，盼高手指点

• tudou85 (2015-9-10 16:21:33)

  我的不加药组的OD值好高，3以上，但是如果因为药物的颜色的话，我减去药物空白后，有些组就会出现负值，这是为什么呢？谢谢！还想问一下，你们加药的时候，每孔是加的10ul么？

• abc816 (2015-9-10 16:21:59)

  
  相关疾病：
  乳腺癌
  
  我做的是乳腺癌MDA-MB-231细胞想铺6000个细胞每孔,经过24生长贴壁后,加CCK8在2小时测得的OD值只有0.3多，能用来做毒性实验吗，OD值是不是太低了？

• yes4 (2015-9-10 16:22:57)

  
  6000个一小时0.3也正常，建怡一小时后每半小时测一次，看看趋势，od最好在1.0附近

• finger (2015-9-10 16:23:26)

  
  相关疾病：
  46XX性发育睾丸疾病
  高手求教一下 我做的是Caco-2 的Cck-8实验 细胞数一定过万了而且2h 4h都测了 但为什么OD值只有0.2左右呢。。。

• junhun (2015-9-10 16:23:53)

  高手求教一下 我做的是Caco-2 的Cck-8实验 细胞数一定过万了而且2h 4h都测了 但为什么OD值只有0.2左右呢。。。
  
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  求教一下，刚接触这东西
  我是细胞中板后24 h加的CCK，想问下加了CCK后只能在1-4h内测才有用吗？
  还想请教，有看到说CCK8比MTT方便，可重复性好。有人说加了CCK后，48h内都可以测OD值，是真是假？
  如果我做药物对细胞增殖的抑制作用，铺一次板能测多个时间点么？比如 24 36 48？

• dior (2015-9-10 16:24:16)

  
  大家有没有出现过，半个小时测的时候OD值是由梯度变化的，但是一个小时的时候梯度变化有没有了，加药而不加药一个水平。

• dog002 (2015-9-10 16:25:04)

  请问有没有做过CCK8检测混合淋巴细胞反应检测淋巴细胞增殖的.4个小时数值在0.3-0.5左右。还能继续延长时间检测吗？混合培养了4天，要换液吗