【求助】如何加24孔板？

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• dog002 (2015-9-11 16:45:14)

  
  24孔板直径为15.6mm，培养底面积为1.9cm2，孔高2cm。实验时每孔所加细胞数目及细胞液的体积依你具体实验目的不同可不同。一般细胞悬液至少需覆盖孔底，总液量不宜超过2mL(约1/2孔高）。要使加板均匀最关键的是在加样前细胞要充分混匀、分散；其次在加样时要垂直缓慢注入，使细胞悬液由中央向四周蔓开，避免加样时液体在孔内形成涡流及气泡的产生。最后，在加完样可“十字形”晃动培养板数次，也可利于细胞的均匀分布。楼主多练习几次即可掌握。

• chengjie79 (2015-9-11 16:45:28)

  
  1 细胞制备成单细胞悬液后，进行细胞计数，计算出每毫升细胞浓度，根据预备接种的的细胞数量，植入相应的毫升数。
  2 至于每孔种多少细胞数量，要根据实验目的和你的细胞增殖能力来计算。可以先拉个浓度梯度，在３到４个孔内从低到高种入不同的细胞数量比如２×１０的４次方，５×１０的４次方，１×１０的５次方，２×１０的５次方，接种后观察生长情况，找到适合的接种密度。
  好运！

• vcve (2015-9-11 16:45:55)

  我最近也一直在接种24孔板,我的经验是每孔2-3*10的5次方/well

• shkudo (2015-9-11 16:48:58)

  
  这个要看细胞的生长速度和形态，有的细胞长的快个大，密度可以稍微小点，细胞个小长的快细胞密度要更小，最重要的是细胞种上后你要晃动一下培养板，让细胞分布均匀，最好是前后左右的晃动，因为有时候用枪吹的话，容易损伤细胞，还有气泡，不利细胞生长。

• vvmmoy (2015-9-11 16:49:12)

  
  我一直总觉得还是铺不匀，细胞堆积在一块，有的地方剩几个细胞，长不起来，而堆积的地方时间长了又会老的脱落

• nn255 (2015-9-11 16:49:27)

  一个孔加5*10的4次好些阿
  对于多孔材料先直接在材料上加5*10的4次方的50微升的细胞液，放20-30分钟后再加培养基效果更好些

• woshi (2015-9-11 16:49:42)

  
  把细胞摇匀，加的时候慢一些就可以了，不用摇晃板子！

• zhy平平 (2015-9-11 16:49:58)

  主要还是要看细胞的形态大小和生长速度，24孔板最多能加2ml，可以把需要细胞数准备好好，然后放到50ml管中，用那种电子移液器最好，每次加之前吹匀50ml管的细胞，一块板能在1min内加完。