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关于将18s作内参照的问题

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2011-9-16 13:24    作者: 三儿abc    来源: 分析测试百科网

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关于将18s作内参照的问题
关于将18s作内参照的问题[转载]


小人前两天拜读了mxbdna2003的大作：基因表达之RT-PCR之我见，真的受益匪浅，我现在也在进行这方面的工作，也希望能找到一个好的内参照，mxbdna2003提到将18s作为内参是最棒的，但是没有将如何实现，而小人作为一个新人实在是不知如何下手，所以请mxbdna2003和坛子中的各位前辈指教，万分感谢！！！
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最新回复

  • 果冻也酸 (2011-9-16 13:25:16)

    also do not know.
    after all, our primers of actin are still a lot.

  • 果冻也酸 (2011-9-16 13:25:39)

    In my opinion i think it determined by CELL TYPES .
    of course i think tat 18s is changed little.
    but i am not sure.

  • +田田+ (2011-9-16 13:26:08)

    我仔细的读了楼上提供的文献，确实是一篇好文章，不过他谈的是real-time PCR，不过我想他的观点应该是可以同样应用于半定量RT-PCR的，不知道各位DX是不是同意我的观点？ 还有不知道文章中关于18s的特异性引物序列是不是可以直接用呢，请各位指点！！

  • 冰激凌小姐 (2011-9-16 13:26:34)

    我想是可以用于半定量的。
    不过你要用他的引物序列，自己最好再确认一下。  

  • 果冻也酸 (2011-9-16 13:27:07)

    我仔细的读了楼上提供的文献，确实是一篇好文章，不过他谈的是real-time PCR，不过我想他的观点应该是可以同样应用于半定量RT-PCR的，不知道各位DX是不是同意我的观点？ 还有不知道文章中关于18s的特异性引物序列是不是可以直接用呢，请各位指点！！

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    of course u can. but it should be the same anealing temperature of qour target gene. or u adapt your gene to his.
    the article is just limit to the serum staving experiment. but of coursr the 18s is best in all experiment, as i have mentioned.
    but for actin, it is also good. in his article , just because the serum stimulation the cell begin to proliferation and the actin changed.

  • +田田+ (2011-9-16 13:27:37)

    感谢各位大侠的帮助，我已经根据在GENEBANK中查到的18S的序列设计了引物，用于半定量RT,效果还可以，多谢，多谢

  • 果冻也酸 (2011-9-16 13:27:56)

    could u show us your primers? of course if u wish.

  • 羊咩咩 (2011-9-16 13:28:15)

    我在做RT-PCR时，同时加入bata-actin和目的基因的引物进行pcr 扩增，但是跑胶的效果不行。有好几个泳道未见道bata-actin片段。而且目的基因一个都没有跑出来，将2个分开跑的时候都跑出来了，请各位专家和高手多多指点。
    还有如何bata-actin进行半定量
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