请教PCR无带

最新回复

• 大猫 (2011-9-16 15:59:09)

  跑胶看一下模板是不是降解了?或者重新提一下模板再试~~~

• 小蜜蜂 (2011-9-16 15:59:31)

  是不是把两条引物提前混好了？最好做时再混，否则很可能引物之间聚合。

• blueeye (2011-9-16 15:59:54)

  是的呀。我都混合了，怎么补救？

• 8黑眼圈8 (2011-9-16 16:00:21)

  模板浓度太高时无条带。

• 阿拉蕾 (2011-9-16 16:00:50)

  是不是把两条引物提前混好了？最好做时再混，否则很可能引物之间聚合。
  
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  i think it is not the problem. we often mix it together before. after all there is denature during the PCR every cycle

• 微笑的海豚 (2011-9-16 16:01:12)

  1、看看酶有无失活
  2、有无污染
  3、体系全换
  4、混合的习惯不好，我有经验，问题较多
  5、实在不行，换个地点做作。有时如果室内换气不好，负氧离子太多或空气中污染物副机也会有不良影响

• 假小子 (2011-9-16 16:01:48)

  模板浓度太高时无条带。
  
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  大葛格，人家都说条件一样了。

• 小困 (2011-9-16 16:02:55)

  我的情况和你说的一样,不行换换别人作一下,是否手法有问题?

• 阿福 (2011-9-16 16:03:17)

  可能的原因是模板降解了！！！

• 阿拉蕾 (2011-9-16 16:03:37)

  有引物二聚体说明Taq酶及缓冲体系良好。不出目的条带很可能是模板的问题－降解。若引物与缓冲体系混合后，长期4度保存，反应体系灵敏度会下降。－20度保存对反应体系灵敏度影响不大。
  仅供参考。

• 韩梅梅 (2011-9-16 16:03:58)

  try to use hotstar

• 大仙 (2011-9-16 16:04:36)

  try to decrease the temprature of aneal
  OR add some more PCR cycle

• 邓布利多 (2011-9-16 16:05:21)

  引物形成2聚体，可否用加热至72度，然后立即放到冰上迅速降温来实现打破2聚体？  

• 假小子 (2011-9-16 16:06:08)

  "混合的习惯不好，我有经验，问题较多"
  能具体谈一下吗？混合时该注意些什么呢？顺序？加样手法？
  谢谢！

• 米米 (2011-9-16 16:06:46)

  我觉得引物自然要分开装好，做的时候还是可以先把除了酶以外的东西都混合好，再分装到几个PCR管里，最后加酶，可以减少加样时的损失。