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【求助】测定分子量，跑电泳可以是SDS-PAGE吗

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2015-10-13 11:17    作者: xiaoxiaojinglin    来源: 分析测试百科网

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【求助】测定分子量，跑电泳可以是SDS-PAGE吗
本人有一PEG修饰蛋白，修饰后分子量在90kD左右，想通过MALDI-TOF测定分子量。问题是蛋白纯度不高，想通过PAGE胶回收的方法获得高纯度的蛋白。搜索了论坛有关蛋白胶回收的帖子，收益匪浅，但仍有问题请教大家：
1. 关于电泳 变性还是非变性：我的用途是测定分子量，跑电泳可以是SDS-PAGE吗？SDS会污染样品导致分子量测定结果吗？最保险的方法是native-PAGE？
2.关于电泳后的蛋白洗脱：论坛上给出了两种方法，一是将胶切碎或研碎，置于溶液中，冰箱过夜，离心得上清再透析浓缩；二是电洗脱，置于透析袋中水平电泳。第一种方法比较简单，但是我担心研碎的过程会不会导致胶成分小部分溶解，从而导致上清中成分复杂，影响质谱测定？在这点上说是不是电洗脱方法会好一点呢？
请虫友们帮忙分析分析，先行谢过啦！
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最新回复

  • rrra6 (2015-10-13 11:17:39)

    类似，也是做电泳分离蛋白，磷酸蛋白 非磷酸蛋白混合物，同求如上问题 呵呵

  • 兔子 (2015-10-13 11:18:13)

    其实蛋白做MALDI-TOF，SDS-PAGE电泳可以的，不必纯化，直接给胶就可以了，保证3ug量就够了

  • 青青草 (2015-10-13 11:18:42)

    请问楼上的虫友，你的MALDI-TOF是在哪里做的？90kd的蛋白是不是不容易做啊？

  • 小熊妮妮 (2015-10-13 11:19:12)

    你好，本人最近在用20KD PEG修饰24KD左右的蛋白，但在跑15% SDS-PAGE电泳后，染色发现经修饰的蛋白拖尾现象很严重，请问你遇到过这种现象吗？该如何解决呢？谢谢！

  • 大嘴猴 (2015-10-13 11:19:47)

    SDS-page的分子量可能和理论分子量有些差异，我的蛋白的size就偏大，打质谱的时候直接从胶上切下目的条带送去就行
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