请教sscp

最新回复

• mimili_901 (2011-9-24 12:48:10)

  如下图：

  
  33579800_snap.jpg

• +田田+ (2011-9-24 12:49:36)

  没关系，因为PCR会产生一些非特异的条带，如果你只有一条带才让人怀疑你的结果！至于为什么不亮，我想你还得从你的PCR找原因！

• 韩梅梅 (2011-9-24 12:49:54)

  一般应该跑出两条带，但跑出三条带并不奇怪，有时候还可能跑出一条带。因为SSCP分析中非变性PAGE电泳是根据单链DNA的空间构象的来实现分离的，构象不同所以位置不同。

• blueeye (2011-9-24 12:50:49)

  你的所有标本都是一个吗，如果确是三条带，那么估计此样品在该点硬是一个杂合体。

• INK (2011-9-24 12:51:17)

  做SSCP，只要片段中有一个基因不同就会出现不同的构象，显示出不同的条带。所以，有多条条带是很正常的事。说明有准种或突变等的存在。

• INK (2011-9-24 12:51:17)

  做SSCP，只要片段中有一个基因不同就会出现不同的构象，显示出不同的条带。所以，有多条条带是很正常的事。说明有准种或突变等的存在。

• INK (2011-9-24 12:51:37)

  至于银染嘛，真是不好意思。我觉得你比我染的还好些。
  请问你是怎么染的？  

• 喵咪 (2011-9-24 12:52:07)

  很奇怪,你的样本量很少,几乎看不见,哪里是你的扩增产物?

• 岸上的鱼 (2011-9-24 12:52:31)

  不同扩增引物所跑的sscp电泳条带数是不一样的，但一般情况下，相同引物sscp的带应该相同，如果出现不同，就有可能是出现了突变，但最终要经过测序来确定，因为，sscp只是用于初筛的。但我没看懂你胶的第一、二条带是什么（从右边看）？Marker 吗？

• mimili_901 (2011-9-24 12:52:56)

  不好意思,我染的是不是很亮
  我一共加了5ul,右边第一和第二个分别是marker,双链对照(未变性的),其余是七个样本,我不明白为什么7个样本都是三条带,这样是不合理的  

• 雪花子 (2011-9-24 12:53:31)

  请教楼上师兄:什么叫做硬是加了一个杂和体?

• @花开花落@ (2011-9-24 12:53:50)

  SSCP本来就是用来快速检测点突变和准种数量的嘛!!!

• @花开花落@ (2011-9-24 12:54:19)

  一楼的,你是怎么做银染的?
  明明很简单的事我就是做不好,痛苦死了!
  求教啦!!!
  急!!!

• 飞天小鹿 (2011-9-24 12:54:38)

  能不能发一张你的核酸银染图,我想看一看,杂志上的毕竟不是原图,多谢多谢!
  我的银染过程是:
  40%乙醇+10%乙酸固定30分钟
  三蒸水漂洗三次,每次5分钟
  0.15%硝酸银染色20分钟
  三蒸水洗三次,每次不超过5秒钟
  1.5%NAOH+甲醛显色越两分钟可见条带(甲醛用量为40ul(浓度是40%))的.
  请楼上师兄指教.  

• 莓菓333 (2011-9-24 12:55:19)

  杂合子是不是应该有四条带?
  我最近也在做这个,但是用EB染色的
  我的条带只有130个BP,请问有经验的人,我应该用多大浓度的胶呢?
  多谢了

• 莓菓333 (2011-9-24 12:55:19)

  杂合子是不是应该有四条带?
  我最近也在做这个,但是用EB染色的
  我的条带只有130个BP,请问有经验的人,我应该用多大浓度的胶呢?
  多谢了

• 喵咪 (2011-9-24 12:55:39)

  我做SSCP的时候，先是将PCR产物进行PAG电泳，条带可以。然后将PCR产物与甲酰胺1：1混合后99度变性10min，再插入冰合中10min ,然后用29：1的非变性PAG进行电泳了有18hours，（同时加了变性和非变性的做对照），结果是未变性的可以看到清晰条带，而已变性的只能在非变性平行处看到隐约的条带，后面没有看到变性的单链DNA条带。这是为什么呢？如果是没有完全变性的话，跑出来的条带应该跟未变性的一样浓；如果已经变性了，为什么没有跑出来？

• 庄梦蝶 (2011-9-24 12:55:56)

  您的SSCP方法是对的,结果也是对的,继续做吧.如果看到一个样品的3条单链带与这些样品的带的位置不一致,那就是找着突变了.

• 庄梦蝶 (2011-9-24 12:56:23)

  您的SSCP方法是对的,结果也是对的,继续做吧.如果看到一个样品的3条单链带与这些样品的带的位置不一致,那就是找着突变了.

• 911 (2011-9-24 12:56:58)

  你跑的是变性胶，还是非变性的胶，非变性胶的效果好像更好些