【求助】蛋白质的糖基化测定

字体: 小中大 | 打印发表于: 2015-11-11 14:48 作者: 886爱来源: 分析测试百科网

手头有一个酶在毕赤酵母GS115/pPIC9K中表达，表达后的酶根据分析，含有很多天冬酰胺等容易糖基化的位点，现在想测定是否真正糖基化了，如果是，能不能测定糖基化位点呢

n111 (2015-11-11 14:49:19)

糖苷酶消化后跑电泳，或者HPLC
糖基化肯定是有的，糖基化程度不好说。比真核细胞的厉害点，比酿酒酵母的轻很多。
PP熊 (2015-11-11 14:49:40)

能用质谱能找到糖基化位点的~ 最近听的基因组学方面的讲座比较作都提到质谱了
n111 (2015-11-11 14:50:04)

MS是不要要求样品的纯度很高啊
malong (2015-11-11 14:50:28)

最近刚表达了个酶，跑SDS PAGE也发现问题了，条带很大，硫酸铵沉淀不下来，感觉是因为毕赤酵母的糖基化原因，不知楼主怎么处理的？
小女人@ (2015-11-11 14:50:53)

可以测定，一下只是我的想法希望可以对您有帮助，把表达的糖蛋白纯化后用相应的蛋白酶酶切，如Glu-c、Trypsin、Lys-C等，找一个适合的，然后将酶解的产物加热100度，冷却室温后加PNGase F酶，过夜孵育或孵育24小时，将切糖链的与没切的样品分别用HPLC分离找到差异组分做MALDI。具体的可以找文献参考。
PP熊 (2015-11-11 14:51:13)

直接做个含糖量测定（苯酚硫酸法）就行了，含糖量的多少来确定糖基化程度。其次还可以确定是N-glycan还是O-glycan，再采用PNGase F 或O-糖苷酶进行酶切后进行质谱分析！