【求助】做lncRNA的RT-PCR时内参如何选择

最新回复

• baidukk (2015-11-11 21:26:38)

  
  你是怎么发现GAPDH这个内参不合适的？

• vcve (2015-11-11 21:26:59)

  
  内参照是否合适需要进行选择的

• 中国特色 (2015-11-11 21:27:16)

  
  我跑了PCR之后，发现GAPDH时30多个循环以后才出来的~比目的还晚呢~

• 中国特色 (2015-11-11 21:27:37)

  
  那内参照一般是怎么样选择的啊~有什么要求吗~

• dreaming (2015-11-11 21:27:53)

  
  楼主，你的引物怎么设计的？然后怎么进行测试引物是否合格？谢谢，我最近也在做这个

• 中国特色 (2015-11-11 21:28:10)

  
  引物是公司设计的~rt-PCR测试引物特异性和扩增效率

• greenbee (2015-11-11 21:28:30)

  
  我就是用GAPDH作内参的，还不错啊

• dmg (2015-11-11 21:28:47)

  
  你好我想问一下你是哪个公司设计的lncRNA引物

• vtongli (2015-11-11 21:29:12)

  楼主，你的引物怎么设计的？然后怎么进行测试引物是否合格？谢谢，我最近也在做这个
  
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  我现在也存在这个问题，您解决了么？引物是从哪个公司定制的？

• tewank (2015-11-11 21:29:32)

  
  相关疾病：
  糖尿病
  内参的选择的原理,其实是说这个基因在你的实验过程中基本保持不变.
  GAPDH虽然在很多细胞实验中都很稳定,但是因为它是个糖代谢相关酶,在很多糖代谢变化的实验中都会剧烈变化,比如缺氧、缺血、糖尿病以及某些肿瘤细胞中。因此内参不是绝对的。同样，beta-actin也不是绝对的，如果涉及到细胞骨架重排，解聚，重组的实验，beta-actin一样不可靠。如果你不确定，可以多选几个内参候选，找一个变化量小的。还有一个供你参考，18S RNA，也可以作内参。

• greenbee (2015-11-11 21:29:49)

  楼主，你的引物怎么设计的？然后怎么进行测试引物是否合格？谢谢，我最近也在做这个
  你的引物设计了吗

• ROSE李 (2015-11-11 21:31:13)

  
  多选几个内参，然后选择，我就找了十个，筛出2-3个

• yyaxw84 (2015-11-11 21:31:32)

  
  请问楼主，你逆转录这一步有用到lnc RNA的特异性引物吗？还是用的随机引物逆转录？求解答！
  谢谢