【求助】急求关于CCK－8的原理和实验方法介绍

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• eor (2015-11-16 16:12:57)

  
  CCK-8试剂可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。其基本原理为：该试剂中含有WST–8[其化学名称为：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐]，它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪 硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲 染料（Formazan dye）。生成的甲 物的数量与活细胞的数量成正比，因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。
  细胞增殖分析
  1、  接种细胞悬液100μl于96孔板内，预先置于37℃，5% CO 2饱和湿度培养箱内培养。
  2、  在每个孔内加入10μl的CCK-8试剂。
  3、  把培养板放在培养箱内培养1-4小时*。
  4、  在450nm波长处测定吸光度，参比波长为600nm或600nm以上。
  细胞毒性分析
  1、  接种100μl细胞悬液于96孔板内。
  2、  预先置于37℃，5% CO 2饱和湿度培养箱内培养24小时。
  3、  加入10μl不同浓度的毒性物质到孔板里的培养基内。
  4、  在培养箱内培养48小时。
  5、  在每个孔内加入10μl的CCK-8试剂，在培养箱内培养1-4小时*。
  6、  在450nm波长处测定吸光度，参比波长为600nm或600nm以上。

• eor (2015-11-16 16:13:13)

  
  细胞悬浮液到底是100u还是200u，每个地方怎么说的不一样，如果打算培养24h，加药后再培养24h，96孔板不是干了吗？求解？？？？？？

• ero11 (2015-11-16 16:13:29)

  
  个人经验是，100ul在96孔板里容易干的，尤其是边缘那些孔

• xiaoxiaoniao (2015-11-16 16:14:32)

  
  请问，参比波长怎么用？