【求助】我的目的蛋白大量重复序列帮我分析一下

字体: 小中大 | 打印发表于: 2015-11-24 13:43 作者: huali 来源: 分析测试百科网

我在做原核表达的过程中，使用了pET-28a载体，Rosetta（DE3）表达菌株，但是37℃诱导表达后，连包涵体都没有看到，基本没有任何的蛋白表达，所以想请问一下大家，能不能帮我分析一下是什么原因？谢谢。
PS：我的目的蛋白大量重复序列，是否是由于重复序列导致蛋白在表达过程中无法折叠，如果是这个原因有什么办法可以解决，谢谢

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【求助】我的目的蛋白大量重复序列帮我分析一下

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最新回复

wwwh (2015-11-24 13:43:39)

我也遇到楼主一样的问题，选用位点是Nco1 和Xho1 ，也是不表达，帮顶一下，希望高人指点一下。
efp (2015-11-24 13:44:13)

我跟你一样，也是用的PET28a，不过我用的菌是BL21。
1.你先到上游看看，是不是载体构建的问题；菌p，提质粒酶切，测序看看。
2.上游没问题的话，改变诱导条件试试，T7lac启动子用IPTG1mM诱导6小时看看；
3你的菌有没有问题，可以把构建的重组载体提出来转化到新的感受态试试，我的问题就是这么解决滴
4.换高浓度胶跑跑看看，高浓度提高分辨率。
jishiben (2015-11-24 13:44:39)

先分析是否含有大量的稀有密码子，如果没有，应该能表达。
如果稀有密码子太多，这个问题就很难办了，方法有2:换含有稀有密码子的表达宿主；二：对基因进行密码子优化，在表达。
danzi (2015-11-24 13:45:05)

试试TB培养基，以前我也遇到同样问题，换了TB培养基就好了！希望你能成功
huali (2015-11-24 13:45:33)

请问哪个软件或网站能分析稀有密码子？烦请告知一下哈，谢谢。
jishiben (2015-11-24 13:46:07)

cuturl('http://gcua.schoedl.de/seqoverall.html') 在线直接就可以分析
如果是稀有密码子的问题若不是特别严重可以通过选择合适的宿主菌解决的。再有就是你关注一下你的酶切位点，是否导致你的目的片段的读码框是否发生移位。你也可以考虑你的诱导剂加入的浓度，但是一般的情况下不会是主要的原因。
malong (2015-11-24 13:46:34)

用的是BL21这个菌株，诱导包涵体蛋白可以使用低温18℃左右
女儿情 (2015-11-24 13:47:07)

请问一下 TB培养基摇菌的时候也加抗生素吗