为什么扩不出来呢？

最新回复

• 韩梅梅 (2011-9-27 15:41:53)

  1.重新设计因物，延长配对碱基数----->25bp
  2.使用高gc扩增kit(takara)
  3.优化pcr条件（提高温度）

• 韩梅梅 (2011-9-27 15:42:15)

  G+C含量高时如何处理PCR
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  PCR扩增长片段且富含GC的方法
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• 冰激凌小姐 (2011-9-27 15:42:42)

  我们遇到这种情况，一般用nest PCR或做二次PCR。另外，要检测你的模板和试剂的质量，最简单的方法是用以前扩出来的引物验证。

• DDD (2011-9-27 15:43:27)

  如果你做了好多PCR，结果还是一样的话，我建议你重新设计引物，或换酶：用宝生物LA酶！！！

• DDD (2011-9-27 15:43:27)

  如果你做了好多PCR，结果还是一样的话，我建议你重新设计引物，或换酶：用宝生物LA酶！！！

• guagua (2011-9-27 15:43:48)

  我觉得可以重新设计引物，最好引物都匹配，可以用oligo设计引物，我们实验室都是用这个软件设计引物，效果都很好。至于加酶切位点可以等你P出来以后从克隆载体上P。

• wu11998866 (2011-9-27 15:44:35)

  不换引物能有更好的办法吗？

• 王六六 (2011-9-27 15:45:32)

  提高退火温度。尽量得到比较集中和清晰的带。切下你认为比较合理的带，然后加入50ul水，再用巢式引物扩增。
  或者是把你的pcr产物趣1ul稀释50倍，再作巢式。

• 8黑眼圈8 (2011-9-27 15:46:00)

  可以试一下这样：
  先算匹配的20bp的退火温度。用这个温度拉5-6个循环。
  然后剩下的循环用29bp的退火温度做。

• fangxiang (2011-9-27 15:46:23)

  可以加一些PCR增强剂如DMSO(1-10%),甘油(5-10%)甲酰胺(1.25-10%),可明显改善.

• 阿拉蕾 (2011-9-27 15:47:04)

  根据经验,我建议你调整一下引物的量,一般情况下大家都建议换引物,但其实大多数情况下引物都是用Oligo6或Premier5设计的,应该问题不是很大,我在做的过程中也遇到过这样的问题,目地带不亮,与之相邻的几条杂带很明显,或者是目地带和相近的杂带都很亮,这种时候调整一下引物的量,降低!会解决上面的问题,做PCR的时候不要被固定的体系所束缚,其实都是可变的,只要出来期望的结果!你不妨一试!