【求助】质谱样品为经过SDS-PAGE电泳之后切下来的片段

最新回复

• malong (2015-11-27 13:19:55)

  楼主你好 我也有同样的问题 跟你一模一样 请问知道是啥原因了吗 怎么解决的呢

• yuanyuan (2015-11-27 13:20:16)

  目前还不知道原因，待解决中

• 无怨无悔 (2015-11-27 13:20:36)

  楼主参考下这个 也许能找到答案 cuturl('http://emuch.net/bbs/viewthread.php?tid=7467723&fpage=1')

• 灵魂 (2015-11-27 13:20:57)

  做质谱角蛋白污染很难控制，带手套只能防止手上的角蛋白污染，但如果手套换的不勤快，在反复摘手套的过程中有相当大的可能性把手套外表污染，进而污染样品。
  另外还有头屑的角蛋白也容易污染样品
  不过表达纯化的样品就算有角蛋白污染也不至于检测不到目的蛋白
  如果你的结果只有角蛋白的话，建议看看是不是表达质粒有问题，如果移码了，就很可能检测不到

• yayayu (2015-11-27 13:21:16)

  第一看要看一下你跑的胶，目的蛋白的量怎么样，如果本身条带很浅很细，那很容易受到污染蛋白的影响，质谱鉴定过程中是很难保证完全没有非样品信号，有的非样品峰如角蛋白的峰、酶自切峰还可以作为内标校准峰，所以并不是什么坏事情。质谱鉴定时的信号本身就是一个此消彼长的过程，如果你的目的蛋白的含量高就会把污染蛋白肽段的信号压制下去，获得更多的样品信号峰，从而获得更可信的鉴定结果。所以如果发现目标蛋白量小，就加大上样量。
  第二酶解过程中的影响，如果你的酶解过程有问题，你再多的样品量也没有用。如果酶没有进入胶内，没有切到样品蛋白，那自然就只能切到胶外的污染角蛋白。所以要仔细检查酶解过程有没有闪失，这个是关键。
  希望对你有帮助，good luck

• xiaoxiaojinglin (2015-11-27 13:21:37)

  在整个实验过程中不仅要带无粉乳胶手套，还要戴口罩，最好戴帽子，另外，检测你的试剂有没有污染，切胶的一套工具用超纯水洗干净。