求助：关于菌落PCR 的问题，谁能帮帮我

最新回复

• boom (2011-10-05 15:01:49)

  我们一般将接种好的菌液煮沸15min，4000rpm离心5min，用上清作模板，效果很好。

• 韩梅梅 (2011-10-05 15:02:19)

  非常方便的方法,我做了不知多少次,从未失手.
  1.挑取菌落加入50ul dd水中,振摇.
  2.99oC, 5'灭活菌液中的酶
  3.12000rpm离心1'去除细胞碎片
  4.取上清pcr,50ul体系取10ul

• 邀月 (2011-10-05 15:02:57)

  你们都是通过这种方式提取细菌DNA的么？
  
  不过那位朋友说的好像是将菌株挑一点点加入PCR体系中。。。

• 清风风铃 (2011-10-05 15:03:27)

  我做就是将菌株挑一点点加入PCR体系中,涮一涮.我没有煮沸和离心.剩下的菌落放到37度继续让它长大一些,方便接种.
  刚做的时候强烈建议大家要做阴性对照和阳性对照,因为有时候会有假阳性,即使阴性对照也会在目的位置出现条带,只是亮度弱一些而已.
  我的经验是:若是真阳性,会很亮,让你不会怀疑;如果似有似无,一般都是假阳性.

• Darcy (2011-10-05 15:03:51)

  可变因素太多了啊

• 大虾米 (2011-10-05 15:04:24)

  最简单的菌落PCR：挑一点点菌株加入PCR管中（事先加5ul H2O），然后按常规加其它试剂进行PCR，不过最后要加热启动HotstarTaq酶，放入PCR仪，先95度变性15min，后按常规PCR步骤操作！  

• 邀月 (2011-10-05 15:05:03)

  最简单的菌落PCR：挑一点点菌株加入PCR管中（事先加5ul H2O），然后按常规加其它试剂进行PCR，不过最后要加热启动HotstarTaq酶，放入PCR仪，先95度变性15min，后按常规PCR步骤操作！
  
  那个朋友就是这么建议我的哦

• 邀月 (2011-10-05 15:05:52)

  这样是不需要提取DNA了 可是会不会影响试验结果呢？
  
  因为我的PCR产物需要跑电泳了再去测序的 检测DNA突变的那
  
  谢谢！！  

• 大桃子同学 (2011-10-05 15:11:03)

  菌落PCR可以起初筛的作用，你可挑些菌落PCR的阳性子用小量快速质粒提取后，用酶切鉴定一下，然后选些酶切鉴定的阳性子去测序！

• 大桃子同学 (2011-10-05 15:11:03)

  菌落PCR可以起初筛的作用，你可挑些菌落PCR的阳性子用小量快速质粒提取后，用酶切鉴定一下，然后选些酶切鉴定的阳性子去测序！