【求助】【讨论】刚做LC-MS/MS 有几个问题想和大家讨论一下

最新回复

• 886爱 (2016-1-03 11:20:27)

  关于第二个问题：用的不是梯度流动相吗？

• qinqinai (2016-1-03 11:20:47)

  比如这个梯度一般多怎么设呢

• zouyou (2016-1-03 11:21:07)

  反向色谱的话，流动相中，有机相的比例越多，出峰时间就越短，所以你可以根据你现有的两个条件来综合考虑，而且梯度淋洗的条件是要多次摸索的，不能操之过急。

• hcy517 (2016-1-03 11:21:25)

  至于TIC，是有用的，它首先可以反映你的仪器的状况，如果它总体趋势是平稳的，这样仪器才算稳定，忽上忽下就不好了，表明仪器检测到的离子流忽强忽弱，那么可能是离子源那里电离不好等等，会影响检测的，比如本可以检测到的却检测不到。其次TIC中出的峰和LC出的峰应该是一一对应的，如果LC出峰而TIC没有，可能是电离不好，比如电离模式没有选对，或者离子源不合适。总之TIC是有用的

• rrra6 (2016-1-03 11:21:46)

  定量的确是根据SIM，但TIC可以看出整体的情况，在哪里可能有杂质，如果你的杂质与样品位置很近，用TIC可以看出这些信息

• daomei (2016-1-03 11:22:06)

  我现在测得一物质很纯  但是峰型有点拖尾，从2级质谱上来看，虽然TIC的峰型不是很好，但是都是很纯的一种物质，这是没分开，还是怎么回事？

• yazi (2016-1-03 11:22:25)

  现在测得一物质很纯  但是峰型有点拖尾，从2级质谱上来看，虽然TIC的峰型不是很好，但是都是很纯的一种物质，这是没分开，还是怎么回事？

• n111 (2016-1-03 11:22:45)

  你说的峰形不好是TIC峰形不好吗？还是色谱的峰形不好？我没有做过定量，但是TIC得峰形一直是不规则的吧，本来就很难让它像色谱那样出对称性好的峰。如果你想它更好一点，可是试试换换参数进行优化，就像解决色谱拖尾峰那样去优化条件。另外想知道它是不是纯物质最简单就是做色谱，只出一个峰就是了

• n111 (2016-1-03 11:23:04)

  我测得物质  色谱峰很好 但是为什么TIC 峰型不是很好呢，按道理说  一样的流动相，色谱峰峰也同样是根据相应强度得来的，TIC也是根据响应强度得来的，色谱峰好的话，TIC的峰型也一样哈，只不过检测器不同而已，谢谢

• daomei (2016-1-03 11:23:23)

  色谱峰就一个，峰型很好，但是为什么用LC-MS测得TIC峰型就不好呢，都是根据响应值的高低，只不过是检测器不同罢了，按道理说根据相应强度色谱峰对应的就是TIC哈，同样的流动相，为什么峰型不一样呢，谢谢

• rrra6 (2016-1-03 11:23:44)

  就我目前做液质的经验看，TIC的峰形本来就很难像液相那样对称的，因为液相是检测光吸收，而TIC是离子流，离子流不会总是很稳定很均匀的，自然峰形不好，而且一个和液相对应的TIC峰里面本来就包含若干个小的小峰（就是一个小尖），每个小峰是一次扫描电压的循环。只要你扣除背景后选择TIC峰得到的质谱图是你所要的分子量就可以了

• danzi (2016-1-03 11:24:03)

  谢谢，现在是这种情况呢，以前的主峰旁边有个很明显的肩膀，我改变流动相后 2个峰合到一起了，这是不是就说明 我改变后的流动相，更适合我要测的东西呢？

• 钻石 (2016-1-03 11:24:29)

  如果你的液相只有一个峰的话，那基本是没问题的，因为有物质才有吸收，而对于质谱，不管是溶剂还是仪器本身，都会带来杂质，所以不太好用它来判断样品是不是纯，TIC的峰只代表总离子强度，有两个峰只说明它在两个时间里检测到更多的离子而已，不说明是两个物质，除非这两个峰对应的液相也有两个峰。TIC有尖峰是正常的，有时还会出现特别宽的峰的情况。液质联用的话，流动相的选择和比例确实对电离情况有影响

• malong (2016-1-03 11:24:48)

  纯物质也不一定能出来很好很对称的峰形，这有可能是你的色谱条件没设好，流动相PH设计不合理，使待测物未能得到很好的分离，造成拖尾，或者你使用的是未封端或未完全封端的柱子，使待测物与硅醇基反应拖尾，另外看看仪器是不是稳定。

• 妮子@ (2016-1-03 11:25:10)

  碰到过和楼主类似的问题   uv下峰相应很大，但将同样的方法嫁接到ms上，在tic上就没有图。
  首先，在uv上我们加酸或者碱，以及离子对试剂，是为了保证待分离组分在色谱柱中尽可能以游离态存在，而保证较好的峰形或者较好的分离度。
  其次在质谱中，调酸或者调碱，是为了保证待测组分在离子源中具有好的离子化效果。
  结合以上两种分析，在uv上分离和检测相应很好的组分，往往在ms上看不到，或者只有微弱的tic响应，原因在于待测化合物在色谱中主要以游离态存在，进行离子化过程中，其离子化效率受到了抑制。
  对于该问题怎么来解决呢   
  首先，在不接色谱柱的情况下，通过两通直接进样，去摸索待测组分的最佳离子化条件。比对该离子化条件与色谱中调酸调碱中的区别，如果差别比较大，最后进行柱后离子化条件衍生过程。实验看看效果如何。
  其次，接上色谱柱，进样品看色谱分离和ms检测，又没有改善，如果没有改善，该考虑ms的离子源是否干净，已经毛细管是否需要进行清洗，如果有改善，在需要对上述优化的条件进行微调，知道得到最佳的分离条件以及最佳的ms结果为止。
  很多虫虫都认为色谱方法可以直接移植到ms上，其实存在这样的误区。
  希望对你有帮助

• wwwh (2016-1-03 11:25:30)

  关于TIC峰，液相峰，二级质谱峰的问题16楼说的好精彩啊，受教。
  关于是否要梯度洗脱的问题，我认为最好是设置梯度洗脱。
  首先，重叠在一起的峰虽然可以通过质谱区分开来，但浓度大的时候可能会产生离子抑制等可能。
  其次，梯度洗脱可以排除杂质的干扰，尤其在基体比较复杂的时候。
  而且，梯度洗脱可以在程序中设置一定的柱子冲洗时间，延长柱子寿命。