【求助】lipo2000转染问题！

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• ALALA (2016-1-12 15:52:09)

  
  MCF－7很好转，转个5，6K的质粒效率都很高
  1 ）用lipo2000转,转染前细胞状态一定要好，lipo2000也不是一定只转增殖细胞，但是在转染前几个小时换个液刺激一下是个不错的主意。
  2） 我用lipo2000转染大多数细胞的经验是有血清比无血清要好，你可以自己去试。
  3） 关于换液的问题，像MCF－7之类的细胞系对质粒带的内毒素都不太敏感，lipo确实有那么点毒性，减半不会显著降低效率。而我对这类细胞从来都不换液，因为没差别。
  4） 效率低可能的原因很多。就质粒而言，质量一般问题不大，主要是量的问题，不知你定量准不准，如果加大质粒量能提高效率，那么有可能你的质粒纯度不行，影响读数，这里就不多说了。

• eve_49 (2016-1-12 15:59:59)

  
  补充一下，转染时没用invitrigen推荐的条件培养基，用的是无血清无抗生素的1640培养液。

• bling (2016-1-12 16:00:14)

  
  你按lipo2000说明书操作就ok了 ，mcf/adr比较好转染的，

• duchy (2016-1-12 16:00:29)

  
  Lipofectamine 2000具有较强的细胞毒性。
  如果是细胞系转染，建议在加入Lipofectamine 2000后2-4小时换液，往往能取得不错的结果。
  另外厂家推荐的转染试剂使用量似乎偏高，建议少用。

• jude (2016-1-12 16:00:44)

  
  转染时用无血清无抗生素的1640培养液是正确的，关键是你转染的时间太长了，一般情况在转染后4到6小时，应去掉转染试剂，加入含有血清的1640继续培养24 小时，这样才能继续后面的实验，Lipofectamine 2000还是很好用的。你可同时做个对照组，转染一个荧光蛋白进去，观察转染的效率！

• Darcy (2016-1-12 16:00:59)

  
  
  你具体是怎么做的实验，还是把实验经过写详细点，很难帮你做出判断，在你没转染前你的细胞状态怎么样？？

• eve_49 (2016-1-12 16:01:24)

  
  我是转染了一个绿色荧光蛋白，转染效率特别低，且四五天后细胞都死了。谢谢！

• seagate (2016-1-12 16:05:38)

  
  请问一下：
  转染4-6小时后一定要换液吗？说明书上好象说可以不换的。另外，转染过程中好象有血清也可以的。是不是呀？

• seagate (2016-1-12 16:05:57)

  
  MCF－7很好转，转个5，6K的质粒效率都很高
  1 ）用lipo2000转,转染前细胞状态一定要好，lipo2000也不是一定只转增殖细胞，但是在转染前几个小时换个液刺激一下是个不错的主意。
  2） 我用lipo2000转染大多数细胞的经验是有血清比无血清要好，你可以自己去试。
  3） 关于换液的问题，像MCF－7之类的细胞系对质粒带的内毒素都不太敏感，lipo确实有那么点毒性，减半不会显著降低效率。而我对这类细胞从来都不换液，因为没差别。
  4） 效率低可能的原因很多。就质粒而言，质量一般问题不大，主要是量的问题，不知你定量准不准，如果加大质粒量能提高效率，那么有可能你的质粒纯度不行，影响读数，这里就不多说了。

• Darcy (2016-1-12 16:06:09)

  
  我做蛋白表达的检测，我想问问lip2000转染48小时就可以检测了吗