【求助】双酶切，EcoR1和Not1，切T载体

字体: 小中大 | 打印发表于: 2016-1-13 16:40 作者: veiwu 来源: 分析测试百科网

37度，切24小时没有切开或者是弥散了，用的是EcoR1的buffer，30ul体系，质粒10，水13，buffer3，两个酶各2，体系有问题吗？还是条件不好？

3.14 (2016-1-13 16:40:38)

NotI endonuclease works in single digestion? It is CpG Methylation sensitive.

According to Takara Products Catolog, double digestion with EcoRI and NotI should be supplied with BSA.

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xiaoxiaoniao (2016-1-13 16:40:54)

分析一下可能的原因：
1，酶加的太多，你可以看一下酶活的定义。
2，切的时间太长，虽然说是没有星号活性，你可以用只加水放37度24小时，载体也会降解的
3，双酶切体系你的buffer用的是没有问题的，但你酶的用量有问题，可以百度一下fermantas double design，这几个关键词，并把双酶切用的两个酶输进去，按网站的要求来做。
ladyhuahua (2016-1-13 16:41:10)

use EcoRI-HF and NotI-HF; NEB Cut smart buffer 2 hours digestion is enough
veiwu (2016-1-13 16:42:32)

没有呀，我们只有thermo scientific的酶，请问我条件应该怎么改