[求助]遇上奇怪的难题~

最新回复

• BOSS2011 (2011-10-12 11:50:51)

  我做的是rt-pcr加巢式  

• BOSS2011 (2011-10-12 11:55:53)

  我单独做空白对照也能扩增出300bp的片段,我都想哭了.那位能帮忙想一下什么原因,

• 荷塘青蛙！ (2011-10-12 11:59:32)

  有其它DNA的污染呗
  如果你的目标条带和这个距离比较远就没什么关系
  有杂带正常

• =菓子= (2011-10-12 12:00:36)

  兄弟，你麻烦大了，一定是污染了，要么是你的移液枪嘴处污染，要么是你用的水污染了，或者是你用的药品如dNTPs等污染，我不知道你是做了多少次了，被污染了找出污染源比较困难，而且耗费相当大，最好是将你用的所有药品，器具全都换成新的，PCR的反应体系配制应在超净台上完成，每次做完都要将紫外灯打开长时间照射，祝你好运吧  

• 长发piaopiao (2011-10-12 12:00:53)

  我也觉得是污染了,可我的目的片段就是320bp,而且最奇怪的是我加了模板的却什么也没扩增出来.所以我才觉得郁闷,大家能帮忙找找原因吗?  

• 98776langtao (2011-10-12 12:03:58)

  你不会是把标签弄错了吧

• BOSS2011 (2011-10-12 12:04:25)

  没有啊!开始我也怀疑,所以我做了三次结果一样,郁闷那!

• 阿拉蕾 (2011-10-12 12:04:48)

  不知道你的空白如何做的？
  
  不知你如何定的大小（300bp）？你的引物有多大？考虑是否是引物二聚体？你可以做一个没有模板和引物的空白看看是否还存在300bp的带
  
  如果不存在，可以判断为引物二聚体或引物污染（后者可能性小）。
  
  如果还存在，可能确实有污染。做一系列平行管，分别不加酶、dNTP、引物、Mg＋＋中的一项，一次就可以看出是什么污染了。

• BOSS2011 (2011-10-12 12:05:51)

  我的marker是dl2000和我的目的片段一样大,我试试你的方法  

• BOSS2011 (2011-10-12 12:06:30)

  我想知道为什么加了模板的却没有条带.几次都这样.谁能帮忙解释一下

• cute (2011-10-12 12:06:56)

  呵呵，虽然你的现象我不能帮你忙，不过我和你说说我以前也遇到了同样问题。空白对照什么都没有，阴性对照倒是和我的目的条带一样大小。后来，我发现我的问题主要是矿物油污染了，更换了后阴性对照没有啦。至于目的产物，我也是试了很久，偶然一次把模板量由1ul减到0.1-0.5ul，结果都可以P出来。我想可能是我的模板有些PCR抑制剂的缘故，降低量后就抑制性降低的缘故吧，我也只是猜测，不知对你有没有借鉴。：）