【求助】打算做某个蛋白的质谱

最新回复

• mimima (2016-1-28 14:49:43)

  用超滤的方法应该没问题，买个超滤管也就100快的样子

• 哈密瓜 (2016-1-28 14:50:05)

  可以控制得到的量吗，一个管子针对同一种样品可以反复使用吗

• zouyou (2016-1-28 14:50:26)

  蛋白浓缩用3k离心管就可以，时间有点长的话，注意加蛋白酶抑制剂防止降解。
  打质谱的话银染考染都可以，不跑胶提供蛋白溶液也可以，但是要提供溶液的成分，方便别人判断应该帮你怎么处理蛋白，因为溶液里很多成分对质谱有影响，要先处理再进行。
  质谱的灵敏度特别高，无论做什么处理，请一定要带口罩和手套，有条件的话带帽子，否则你会在自己的质谱检测报告中看到很多keratin角蛋白的。

• danzi (2016-1-28 14:50:48)

  量可控，调节离心时间和转速，只要处理的好，超滤管可以重复使用的，网上资料很多的，可以查找下其使用方法，祝好:hand:

• 大嘴猴 (2016-1-28 14:51:10)

  看了一下质谱相关帖子，提到银染与质谱不兼容，不是您是否用过银染打质谱的经历

• 钻石 (2016-1-28 14:51:40)

  最近我也是在细胞裂解液中纯化蛋白，有时候要纯化一个星期，就只是在细胞裂解时加过蛋白酶抑制剂（包括碘乙酰胺，PMSF,抑肽酶）。一直犹豫要不要补加抑制剂，想请教一下，我纯化过程中该以何种比例和频率补加抑制剂，抑制剂加多了会不会有副作用，望指教

• 跳跳哈里 (2016-1-28 14:52:05)

  我就是专门做质谱的，不管什么胶送过来，都要进行处理的。

• 钻石 (2016-1-28 14:52:28)

  您的意思是银染也可以做质谱

• 美人鱼 (2016-1-28 14:52:50)

  第一天用抗原抗体亲和层析，纯化得到的浓度虽然不高，但是western-blot能检测到。接下来反复过柱子，大概一个星期，将得到的蛋白溶液透析浓缩，可是western竟然检测不到了。很奇怪，难道是蛋白浓度低且在4度放了一个星期，蛋白降解了。浓缩条件是聚乙二醇20000，透析是4度PBS,个人认为也不会有问题。除了蛋白裂解液中的蛋白酶抑制剂，纯化的一个星期中都没有补加，不知大家如何补加了，是否对我的降解也有影响，疑惑，求指点。

• 双子座 (2016-1-28 14:53:26)

  一天用抗原抗体亲和层析，纯化得到的浓度虽然不高，但是western-blot能检测到。接下来反复过柱子，大概一个星期，将得到的蛋白溶液透析浓缩，可是western竟然检测不到了。很奇怪，难道是蛋白浓度低且在4度放了一个星期，蛋白降解了。浓缩条件是聚乙二醇20000，透析是4度PBS,个人认为也不会有问题。除了蛋白裂解液中的蛋白酶抑制剂，纯化的一个星期中都没有补加，不知大家如何补加了，是否对我的降解也有影响，疑惑，求指点。

• huali (2016-1-28 14:53:58)

  你不能制备多一些蛋白质？

• 哈密瓜 (2016-1-28 14:54:24)

  是这样，我是用抗原抗体亲和层析，对抗体要求量很大，抗体购买的明显较少，所以我只能积少成多。

• 兔子 (2016-1-28 14:54:47)

  能不能用别的方法来纯化

• 8899 (2016-1-28 14:55:12)

  用低于蛋白分子量的超滤凝缩管浓缩，蛋白纯度大于90%，可以把蛋白液（100微升左右就可以）交给一些专门得公司去做，省时省力，而且比自己处理的要好。