【求助】dgge最后一次分离切胶后用不带GC夹子引物...

最新回复

• wanglaoshi (2016-2-16 22:09:54)

  这个我也遇到过，还有可能就是模板浓度不够。另外你可以做一个二次PCR！
  

• jiushikeshui371 (2016-2-16 22:10:16)

  请问你的胶是用什么方法染色的？切下来的胶是怎么处理的呢？这些都比较关键。

• 不请自来 (2016-2-16 22:11:07)

  gelred染色半小时，切胶后加双蒸水50ul微震荡十来分钟，放冰箱。。
  问题是提取的DNA模板也不能用不带GC的引物扩增，只要换引物就残疾

• sunbent (2016-2-16 22:11:21)

  试一试MIX吧，可能模板中含有酶抑制剂。

• 不请自来 (2016-2-16 22:17:57)

  QUOTE:

  原帖由 sunbent 于 2016-2-16 22:11 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  试一试MIX吧，可能模板中含有酶抑制剂。

  天根的热启动mix了，如果有抑制剂，怎么带GC的能P出很亮很亮的目的条带呢

• yyaxw84 (2016-2-16 22:18:22)

  用这个引物扩增一下纯菌的dna试试。按这个描述可有可能是引物出现问题了，换新的引物试试。
  

• 不请自来 (2016-2-16 22:18:47)

  QUOTE:

  原帖由 wanglaoshi 于 2016-2-16 22:09 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  这个我也遇到过，还有可能就是模板浓度不够。另外你可以做一个二次PCR！
  

  就是用第一次的PCR结果为模板再做一次条件和体系都相同的PCR？这个我试试

• 不请自来 (2016-2-16 22:19:13)

  QUOTE:

  原帖由 yyaxw84 于 2016-2-16 22:18 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  用这个引物扩增一下纯菌的dna试试。按这个描述可有可能是引物出现问题了，换新的引物试试。
  

  还没做过纯菌的呢

• seagate (2016-2-16 22:19:36)

  就是用第一次的PCR结果为模板再做一次条件和体系都相同的PCR？这个我试试...
  
  你查查二次PCR的体系吧，网上有，另外，程序的话退火10个就够了！散金啊(*^^*)
  

• seagate (2016-2-16 22:19:53)

  还没做过纯菌的呢...
  
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  嗯，怀疑这个不带GC夹子的引物有问题，建议用纯菌试试，或是干脆更换新的引物，别忘了阳性对照

• chengjie79 (2016-2-16 22:20:10)

  个人感觉有核酸染料就不好扩增了，我是用的银染法。

• 不请自来 (2016-2-16 22:20:33)

  嗯，怀疑这个不带GC夹子的引物有问题，建议用纯菌试试，或是干脆更换新的引物，别忘了阳性对照...
  
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  确实是引物的问题，谢谢啦，问题已经解决了

• 不请自来 (2016-2-16 22:20:57)

  个人感觉有核酸染料就不好扩增了，我是用的银染法。
  
  =====================================================
  
  谢谢啦，是正反引物浓度不对称导致，还是谢谢啦！祝你实验顺利！

• 不请自来 (2016-2-16 22:21:20)

  试一试MIX吧，可能模板中含有酶抑制剂。
  
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  谢谢，问题已经解决，是引物的问题呢

• #甜# (2016-2-16 22:21:43)

  谢谢啦，是正反引物浓度不对称导致，还是谢谢啦！祝你实验顺利！...
  
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  这样啊，那我以后用到的时候，也应该注意一下了
  

• mybioon (2016-2-16 22:22:15)

  gelred染色半小时，切胶后加双蒸水50ul微震荡十来分钟，放冰箱。。
  问题是提取的DNA模板也不能用不带GC的引物扩增，只要换引物就残疾...
  
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  找到问题了吗？
  建议：连扩两次；或者引物也可能有问题；再者有无GC，P的条件也是要适当变化的，有调整吗？

• redbutterfly (2016-2-16 22:22:33)

  你好  什么叫正反引物浓度不对称？我最近做DGGE割胶回收 pcr老是条带弥漫