【求助】蛋白质质谱分析样品预处理

最新回复

• QQ爱 (2016-2-25 13:53:27)

  配胶和切胶避免角蛋白污染，配胶试剂专用；
  切胶样品-80℃保存，不同仪器可能要求不同；
  如果考染能看到带就可以做质谱，银染出的带不一定够做质谱。

• 双子座 (2016-2-25 13:53:50)

  恩谢谢。想再问一下放在-80保存的话……就是裸胶放进去= =？还是要在什么buffer里？用塑料袋封上……之类的？

• xiaoxiaojinglin (2016-2-25 13:54:29)

  请问，“老板跟我说就是直接把WB的胶切下来送去做就可以了”   --切的 是 电泳胶，   还是 直接切的 WB显色的膜呢？  谢谢

• yayayu (2016-2-25 13:54:50)

  电泳胶，不要转膜。之后的处理应该是切胶，然后把胶融掉以提出蛋白= =？？所以蛋白含量太少就白瞎了……

• 女儿情 (2016-2-25 13:55:22)

  用EESI-MS测定大分子量蛋白质的常用溶剂，萃取剂，以及试验相关的各个参数，以供参考。

• 大花猫bb (2016-2-25 13:55:45)

  常用溶剂也还是做ESI用的那几种,水甲,醇,甲酸,乙酸等,

• PP熊 (2016-2-25 13:56:06)

  溶剂就是水,甲醇,乙腈，离子对试剂就是甲酸,乙酸,氨水,TFA

• PP熊 (2016-2-25 13:56:32)

  有个简单的纯化方法就是用反相膜萃取蛋白质溶液,然后用水洗反相膜,再用做质谱的溶剂洗从反相膜上洗下来,就可以进样了.

• 女儿情 (2016-2-25 13:56:52)

  复杂的,就有凝胶电泳.毛细管电泳,HPLC等,都要自己摸索条件的,不同的蛋白质性质是不同的哈.

• 小女人@ (2016-2-25 13:57:12)

  蛋白质没有所谓的萃取剂吧？看你样品的状态，如果是高盐溶液，必须要除盐，除盐用HPLC C4，C8柱或者用milipore的ziptip C18富集蛋白，有一套通用的procedure。ESI必须要除难挥发性盐除的很干净，否则不仅信号很糟糕，还污染质谱。
  溶剂一般是50%H2O，50%ACN或MeOH，再加0.1%甲酸帮助离子化。当然如果你的蛋白对酸非常不稳定的话，也可以考虑是不是要加点挥发性缓冲盐。

• 大大 (2016-2-25 13:57:34)

  看看好,是C2,C8的反相膜,老兄.

• 无怨无悔 (2016-2-25 13:57:55)

  请问楼主是在哪里做的质谱分析蛋白样品？

• zouyou (2016-2-25 13:58:19)

  看看这个吧，我是按这个来的。