[求助]有关RNA电泳问题

最新回复

• #甜# (2011-10-19 14:39:07)

  也许是你的RNA有轻微的降解。但是RNA提取每次的情况都不同，就象提取质粒DNA一样，有时有三条带，有时两条甚至一条。这种有实验造成的差别应该问题不大，既然你的三条带都看到，说明你提的RNA效果不错，可以继续下面的实验。  

• 101010 (2011-10-19 14:39:34)

  多些楼上朋友的指点，还有问题需要请教，我下面要将RNA逆转成cDNA，如何根据分光广度值计算RNA含量,有公式吗?另外我想用oligo(dT)15,如果要逆转2ugRNA，需要加多大量？  

• 969 (2011-10-19 14:40:42)

  根据A280的值来计算，A280为1时相当于40ug/ml。  

• 101010 (2011-10-19 14:41:34)

  楼上的朋友，还需要考虑我测OD值稀释的浓度吗

• birdfish (2011-10-19 14:42:32)

  楼上的兄弟说错了，应该根据A260的值来计算。公式：
  
  RNA的浓度（ug/ul)=A260*40*稀释倍数。
  
  我用的是oligoT(18) （0.5ug/ul)，反应体系中加1ul.

• #黄药师# (2011-10-19 14:43:16)

  再请问，A260的值指的是OD值吗？我那样算出的值很大呀，一般应该是多少？多谢

• birdfish (2011-10-19 14:44:08)

  是OD值，一般看你提取的RNA的效果啦，如果好的话可以达到2-3ug/ul.不知道你的结果有多少？你最好还要测个A280的值，然后计算260/280看一下纯度如何。比值在2.0是最好的。

• birdfish (2011-10-19 14:44:08)

  是OD值，一般看你提取的RNA的效果啦，如果好的话可以达到2-3ug/ul.不知道你的结果有多少？你最好还要测个A280的值，然后计算260/280看一下纯度如何。比值在2.0是最好的。

• jude (2011-10-19 14:44:40)

  我是从大鼠肝脏提取的RNA,260nmOD0.0468,280omOD0.0249,稀释倍数为300，而且我这次提的组织比较少，上次提完后OD值比这次还大，如果按照这些值算浓度是561UG/UL，这是怎么回事  

• birdfish (2011-10-19 14:45:26)

  呵呵，你的计算结果还需要除以1000，因为经验值是1OD=40ug/ml,而你结算结果的单位是ug/ul,所以你计算的浓度是561ug/ml,也就是0.561ug/ul.  

• nut6694 (2011-10-19 14:46:23)

  请问各位大侠，我在跑电泳观察RNA完整性的时候，跑出了5s,18s,28s，其中5s条带最暗，但是28s比１８s稍亮并为达到２倍程度，请问原因是什么？多谢
  
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  我认为所谓5s带，实际上是降解带。我电泳的体会是，RNA降解越厉害，这条带越强。似乎所有降解后的小分子RNA，都集中到了这个位置。
  
  不知道我说的对不对，希望大家探讨。

• she (2011-10-19 14:47:01)

  总之，我认为好的RNA应该是28S：18S=2：1，所谓5S带越淡越好。