【求助】关于大肠高密度发酵自溶

字体: 小中大 | 打印发表于: 2016-3-05 15:22 作者: 锤子来源: 分析测试百科网

最近在做大肠发酵，BL21DE3,表达蛋白。用半合成培养基，发酵前期采用间歇式补料，中后期稳定补料，设计周期是30h。现在遇到的问题是发酵到20h以后DO会突然快速下降，5L罐子DO下降后调慢补料后DO会重新维持稳定，菌体也没有自溶；500L罐子DO开始下降后就会快速自溶。求大神帮忙分析下原因～

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【求助】关于大肠高密度发酵自溶

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最新回复

junjie05 (2016-3-05 15:22:41)

还是要确保补料及时
moonlight (2016-3-05 15:23:39)

PH值有变化时开始补料，用补料的方法来控PH。
锤子 (2016-3-05 15:24:17)

QUOTE:
原帖由 junjie05 于 2016-3-5 15:22 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
还是要确保补料及时

补料是持续稳定流加的。你的意思是这个时候补料速度可能不够吗？
锤子 (2016-3-05 15:24:51)

QUOTE:
原帖由 moonlight 于 2016-3-5 15:23 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
PH值有变化时开始补料，用补料的方法来控PH。
氨水自动调节pH，补料稳定后pH基本没波动～是停止补料，停止加氨水后，pH上升后再补料吗？
caihong (2016-3-05 15:25:19)

补料是持续稳定流加的。你的意思是这个时候补料速度可能不够吗？
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一般做高密度发酵在初始糖源耗完之后，会出现DO上升的情况，这个时候补料诱导，DO会下降至一定水平后稳定；而你的实验是一直在补料，碳源保持充足，DO下降可能说明你的菌在快速增长繁殖时期，调慢补料后进入饥饿培养，控制了菌的比生长速率，DO稳定在一个较低水平也是可以理解的；如果500L也开始一直下降，菌体量如果增加明显，说明你补料速度可能大了，如果像你说的出现自溶现象，那么建议你注意发酵液的澄清度和起泡情况，因为有可能是感染噬菌体；重复试验几次，换个设备，如果都是这样，再找找是不是有其他因素没有发现。希望能帮到你
锤子 (2016-3-05 15:26:02)

一般做高密度发酵在初始糖源耗完之后，会出现DO上升的情况，这个时候补料诱导，DO会下降至一定水平后稳定；而你的实验是一直在补料，碳源保持充足，DO下降可能说明你的菌在快速增长繁殖时期，调慢补料后进入饥饿培 ...

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这个是一次5L发酵DO变化图

w201h3056795_1456825777_918.png
锤子 (2016-3-05 15:26:21)

一般做高密度发酵在初始糖源耗完之后，会出现DO上升的情况，这个时候补料诱导，DO会下降至一定水平后稳定；而你的实验是一直在补料，碳源保持充足，DO下降可能说明你的菌在快速增长繁殖时期，调慢补料后进入饥饿培 ...

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自溶排除噬菌体和染菌问题后还有可能是什么原因引起呢？
45778 (2016-3-05 15:27:05)

氨水自动调节pH，补料稳定后pH基本没波动～是停止补料，停止加氨水后，pH上升后再补料吗？
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PH一开始变化时不用氨水控，直接用补料的方法来控试试，我们上罐就是用的这种方法，效果还不错的。
3648755 (2016-3-05 15:27:36)

自溶排除噬菌体和染菌问题后还有可能是什么原因引起呢？
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如何排除噬菌体的污染？
gmt (2016-3-05 15:28:10)

自溶排除噬菌体和染菌问题后还有可能是什么原因引起呢？
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生长速率过快，菌体会提前进入衰亡期，导致菌体自溶；还有PH波动太大和压力过高都有可能导致溶菌出现。
bongte (2016-3-05 15:28:33)

自溶排除噬菌体和染菌问题后还有可能是什么原因引起呢？
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菌体会合成一种酶，在菌体生长后期引起自溶
bongte (2016-3-05 15:28:50)

另外就是碳源的比例不合理