[求助]PCR后胶一半暗一半亮是怎么回事？

最新回复

• 绵绵 (2011-10-20 13:08:01)

  我也遇到过一样的情况，说不出肯定的原因。不过后来不断的调整做胶的条件，情况就好多了。加EB时溶胶温度不要太低，量不要太多，然后要充分混匀。不知这样做对你的胶有没有帮助？？？
  祝你好运！

• wawa (2011-10-20 13:08:21)

  EB和DNA反向移动，跑时间长了EB会跑出胶外，所以会半明半暗。把胶做长一些就解决了。  

• 阿拉蕾 (2011-10-20 13:09:16)

  EB会带部分电荷，在电泳场的作用下会向负极泳动，从而导致靠近加样孔的那半边胶中的EB含量较高，染色结果当然是靠近加样孔的条带更亮。解决的办法最好是在跑完胶后对胶染色，EB染液的浓度为（1ug/ml，用电泳缓冲液或去离子水配都可以），室温大概染10min中左右（新鲜配置的染液），然后稍用水冲洗，就可以观察了。
  
  该方法的优点是染色均匀，尤其适合于对所提DNA的粗略定量，不会因为EB的问题影响定量MARKER上下条带的亮度。

• 韩梅梅 (2011-10-20 13:09:46)

  因为在电泳过程中，溴化乙锭向负极移动，与DNA的电泳方向相反，较长时间的电泳会造成靠正极方向的凝胶中EB含量很低，对含量较小的小分子量DNA片段检测困难，而负极方向的凝胶中EB含量则较高，所以靠近加样孔附近条带较亮。如出现这种情况，需在电泳后，重新将凝胶在0.5ug/ml的EB溶液中染色30-40分钟。

• 莓菓333 (2011-10-20 13:10:24)

  这种情况我也经常遇到，一般我们跑胶是有两排加样孔，这样前边一排加样孔中的样品染色会淡一些，解决的方法是把胶从中间纵向切开，这样前边半块胶中的EB不会跑到后边半块胶中，这样得到的图像会比较好。

• 冷眼相对 (2011-10-20 13:10:46)

  先电泳后染色吧！！  

• HP007 (2011-10-20 13:11:10)

  还可以在阳极槽中加上50ulEB，或是降低EB在胶中的浓度。  

• #甜# (2011-10-20 13:19:20)

  泡半个小时效果不错

• 还是孩子 (2011-10-20 13:19:47)

  书上说的是先电泳，后染色，很多人都是将EB直接加入凝胶中，这样就省去了染色的过程，一般EB不易多加，每100ml胶中加5-7微升就可以了。

• windy+++ (2011-10-20 13:20:32)

  感觉荧光染料的效果比较好，为什么不选择荧光染料
  安全放心
  以前用Eb但心死了，有时候戴双层手套都不管事。