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【求助】DNS法测α淀粉酶 抑制实验 反应进程曲线...
本人是个酶方面的新手，想做某种物质对淀粉酶的抑制作用，这是第一次，采用的是DNS法测定产物糖的方法。【求助】DNS法测α淀粉酶 抑制实验 反应进程曲线...
我是自己提取天然产物，然后买淀粉酶，测定天然产物对淀粉酶的抑制作用。
① 我想先做反应进程曲线，确定合适的酶活和反应时间。
a. 预实验，1%的淀粉浓度，我选取了0.1浓度的酶，结果1-6min的OD值都是在0的上下浮动，我怀疑是淀粉酶失活了，或者浓度太低了（酶溶液一开始不懂，放在了冷藏一晚上，估计失活了）
b.于是，我配置了1浓度的酶，然后配置完成立刻去测定，从1-10min的OD值都是0.5左右波动
c. 我蒙圈了，嗯，可能是酶浓度太大了，所以反应很快，1min之内就把所有淀粉都反应成了糖。于是，我配置了0.6和0.3的浓度的酶，测定1-6min的OD值变化，然后0.3的不知道为什么是乱七八糟的，0.6的结果还行，1min的时候是0.2左右，但是从2min开始之后就全部都是0.5左右。
d.让我很奔溃，合适的酶浓度和反应时间，到底怎么才能准确的测定出来，我的问题到底出在那里？？？
如果说我的酶反应饱和了。为什么OD的最大值才0.5左右，我看有几个文献都达到了1左右。
② 看文献，有的测定一种物质对淀粉酶得抑制，做了阴性、阳性和空白对照，可是有的实验就没有阳性对照，一定要做吗？
③ 看文献，有一篇文献的抑制剂是有有机溶剂溶解的，就是水和乙醇一定比例，那我在想，乙醇不会对酶的活性产生影响吗？这篇文章科学么，居然做出来，结果很好，而且还发表了！
求大神帮忙，我是试了好多还不出满意结果，感觉奔溃了！谢谢
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最新回复
雪原 (2016-3-10 14:56:20)
圆圆圈圈 (2016-3-10 14:58:35)
雪原 (2016-3-10 14:59:02)
QUOTE:
亲有什么建议吗？一个人做重复不可能一下子保证那么多，难道要1分钟的做完了放20min冷却定容去测，然后再做2min的，然后再做3分的么，这样效率好低。这么看，这个实验人为的误差是很大的，因为1秒钟就差很多
圆圆圈圈 (2016-3-10 15:01:36)
雪原 (2016-3-10 15:04:46)
雪原 (2016-3-10 15:05:40)
QUOTE:
亲你知道分子式要干嘛呀？反正我不研究这个酶，我只是用用。但是感觉每次浓度都不合理，出不来反应进程曲线【求助】DNS法测α淀粉酶 抑制实验 反应进程曲线...