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【求助】2-DE与质谱联用和液质联用路线是蛋白质组
开卷考坑爹的题目:【求助】2-DE与质谱联用和液质联用路线是蛋白质组
1、2-DE与质谱联用和液质联用路线是蛋白质组学分析的两大主要方法,分别是在蛋白质水平和多肽水平上进行蛋白质组学分析,2-DE与质谱联用路线能否在多肽水平进行分析,液质联用路线能否在蛋白水平进行分析,如果不行,请说明理由,如果可行,请说明技术路线。
2、翻译后修饰(包括糖基化、磷酸化、泛素化等)的蛋白质组学研究中共性核心技术是什么?请简洁设计一个利用该核心技术进行翻译后修饰(糖基化、磷酸化、SUMO化中任意一种)蛋白质组学研究的实验方案。
3、Please describe how to prepare samples (cultured cells or animal or plant tissues extracts) and do protein complex via immunoprecipitation and confirm it with immunoblotting (IP-IB approach).
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最新回复
886爱 (2016-3-12 11:21:01)
修饰的共性核心技术在于:对于修饰蛋白的分离和富集。因为不论是磷酸化还是糖基化或者泛素化,这些蛋白在总的蛋白质的表达量中所占的比例是很低的,通常情况下不容易被检测到,如果要对这些蛋白的进行定量或者定性的研究,首先是要对目标蛋白进行富集。也就是单独的将这些修饰蛋白分离和集中起来,而对没有发生修饰化的蛋白弃之。实验设计方案(基于iTRAQ技术的磷酸化蛋白质组学得实验实验设计方案):
样品的制备和完整性检测----FASP酶解-----iTRAQ标记-----TiO2磷酸化富集------毛细管高效液相色谱-----ESI 质谱鉴定-----ESI质谱数据分析 (此为实验流程或者步骤,若用文字详细描述如下:)
1、样品制备及样品质控。
2、样品酶解及对样品进行iTRAQ试剂标记,
3、进行TiO2富集并进行质谱分析,以检测样品iTRAQ标记TiO2富集磷酸化情况,
4、每个组分分别进行高精度质谱,
5、进行磷酸化定性定量分析,出具正式实验报告。
所知有限,希望能对楼主有所帮助。也希望你能有个好成绩噢!
:hand:
QQ爱 (2016-3-12 11:21:25)
xiaoxiaojinglin (2016-3-12 11:21:47)
n111 (2016-3-12 11:22:09)
我按照经验说点吧。首先抽血,然后提取血液当中的总蛋白,然后根据某方法中的需求进行总蛋白质的酶解,再然后对所得肽段进行色谱过柱,再质谱鉴定,最后拿到所有总蛋白的表达量的变化。这个变化应该包括你所提到的BNP的表达量的变化。然后就是分析和得出结论了。
通常的蛋白质组学的方法都是这么如此吧,当然针对不同的方法有不同变化。还要说明的是,蛋白质组学中某蛋白或者总蛋白的浓度和量的变化是两个概念,希望你不要混淆。我仔细看了下你的题目,应当是说BNP的表达量下降的意思才对。
以上所言并不肯定是正确的,仅供参考。你只能自力更生或者求助其他人了。祝好运!
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