【求助】提取蛋白的浓度太低重新采样提蛋白已经不可能

最新回复

• yazi (2016-3-12 11:34:01)

  硫酸铵沉淀、冻干或者是密理博的超滤管浓缩

• 大花猫bb (2016-3-12 11:34:20)

  买一个millipore的超滤管就可以了，一个100左右，离心就可以了。你要的蛋白是多少KD的？

• 兔子 (2016-3-12 11:34:39)

  放在透析袋里 peg6000透析

• jishiben (2016-3-12 11:35:00)

  30kd.但这样会不会对蛋白损失过大啊，样品本来就不多。现在保存在裂解液中。

• wwwh (2016-3-12 11:35:19)

  会不会导致样品损失过多呀

• malong (2016-3-12 11:35:40)

  蛋白存放在裂解夜中，这样能做吗？

• PP熊 (2016-3-12 11:36:07)

  蛋白存放在裂解液里也很容易降解的

• aaby (2016-3-12 11:36:31)

  以前我用透析袋做过浓缩，但是你的样品估计不行，因为样品量较少，但是你可以用超滤管试试

• xiaoxiaojinglin (2016-3-12 11:36:50)

  那你用3KD的或者10KD的，你的目标蛋白不损失就可以了。浓缩效果挺好的。一般用三种，一个是0.5ml浓缩到20ul，4ml浓缩到60ul，15ml浓缩到250ul.

• 无怨无悔 (2016-3-12 11:37:09)

  我们之前 是电洗脱方法纯化蛋白 蛋白融在溶液中  外加peg干燥 不知你的情况 可以试一下

• mimima (2016-3-12 11:37:29)

  是蛋白浓度低，量还大吧？
  最好的方法就是超滤浓缩

• jishiben (2016-3-12 11:37:50)

  超滤，冻干可以考虑，电透析估计你是不行了，蛋白含量少。你做WB的话，不可以加大上样量么？

• xgy412 (2016-3-12 11:38:14)

  电透析我做过，感觉损失还是比较大的，超滤的话，超滤管第一次用的时候损失最少，重复用的话就完犊子了

• malong (2016-3-12 11:38:34)

  硫酸铵 沉淀后 里面离子强度太大，跑胶会很歪的，不建议楼主那样做

• 双子座 (2016-3-12 11:38:56)

  我看了上面的几个方法，
  1.超滤，膜上面残留你得考虑
  2.透析，如果量小的话，损失还是很恐怖的
  3.硫酸铵沉淀，不利于后面跑胶，做WB
  我的建议是，放冷冻干燥机里面抽真空浓缩，蛋白含量不会损失，回收率100%，如果开始缓冲液的离子强度不是很高，浓缩过后也不会有什么影响。建议这个

• 大花猫bb (2016-3-12 11:39:21)

  请问冻干之后粉末如果不能完全溶解该怎么办呢？我的样品中杂质较多，甚至要多于蛋白质，如何才能单独分离出蛋白质？

• daomei (2016-3-12 11:39:45)

  用超滤管浓缩
  

• 兔子 (2016-3-12 11:40:12)

  用超滤管浓缩，效果比较好