【求助】质谱能检测大分子量蛋白吗

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• efp (2016-3-12 11:54:31)

  肯定是可以的，关键是要选对仪器
  每个蛋白都有理论上消化后所得出的不同肽段，这些肽段的质量（分子量）就是这个蛋白的肽指纹图。当一个未知蛋白被酶解，用质谱可以检测出其中所含有几乎所有肽段的质量。然后把这些质量与数据库中已知的所有蛋白指纹进行匹配。匹配分值高过一定的 就可以认为索要坚定的蛋白就是那个目的蛋白。步骤：2DE 切点 消化 送入质谱仪分析 质谱仪自动获得质量数 送入数据库进行搜索 得出结果。

• huali (2016-3-12 11:54:54)

  不知道你所谓的检测是定性还是定量，定性的话很简单，像2楼说的。但是定量的话，觉得可能性就小，多聚体不好估算。

• mimima (2016-3-12 11:55:13)

  这个完全是可以检测的

• rrra6 (2016-3-12 11:55:44)

  用EESI-MS测定大分子量蛋白质的常用溶剂，萃取剂，以及试验相关的各个参数，以供参考。

• efp (2016-3-12 11:56:08)

  常用溶剂也还是做ESI用的那几种,水甲,醇,甲酸,乙酸等,

• 兔子 (2016-3-12 11:56:30)

  溶剂就是水,甲醇,乙腈，离子对试剂就是甲酸,乙酸,氨水,TFA

• 小熊妮妮 (2016-3-12 11:56:50)

  有个简单的纯化方法就是用反相膜萃取蛋白质溶液,然后用水洗反相膜,再用做质谱的溶剂洗从反相膜上洗下来,就可以进样了.

• 妮子@ (2016-3-12 11:57:11)

  复杂的,就有凝胶电泳.毛细管电泳,HPLC等,都要自己摸索条件的,不同的蛋白质性质是不同的哈.

• 大花猫bb (2016-3-12 11:57:38)

  蛋白质没有所谓的萃取剂吧？看你样品的状态，如果是高盐溶液，必须要除盐，除盐用HPLC C4，C8柱或者用milipore的ziptip C18富集蛋白，有一套通用的procedure。ESI必须要除难挥发性盐除的很干净，否则不仅信号很糟糕，还污染质谱。
  溶剂一般是50%H2O，50%ACN或MeOH，再加0.1%甲酸帮助离子化。当然如果你的蛋白对酸非常不稳定的话，也可以考虑是不是要加点挥发性缓冲盐。

• xgy412 (2016-3-12 11:58:03)

  看看好,是C2,C8的反相膜,老兄.

• yayayu (2016-3-12 11:58:25)

  请问楼主是在哪里做的质谱分析蛋白样品？