【求助】RAW264.7复苏细胞不贴壁 生长缓慢是怎么回事？

最新回复

• junjie05 (2016-3-16 15:02:26)

  慢慢等一下吧
  只要没染菌，慢慢养着吧，就别老折腾它们了。

• okhaha (2016-3-16 15:03:34)

  QUOTE:

  原帖由 junjie05 于 2016-3-16 15:02 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  慢慢等一下吧
  只要没染菌，慢慢养着吧，就别老折腾它们了。

  同意，前一阵子，我养的Raw 264.7的时候也遇到同样的问题，稀疏，生长缓慢，都想放弃了，于是有四五天没管他们，结果反而长满了。柳暗花明的感觉。

• 1221 (2016-3-16 15:03:48)

  因为你的细胞太稀了，所以长的一团团的，这个长好了传下一代密度大些，我一般都是1:5。你冻存的时候估计没冻好，所以复苏不行，可以把两管放到一瓶复苏。

• bongte (2016-3-16 15:04:04)

  建议楼主用心点吧！我刚复苏的细胞，前2天都是抱团的！这里一堆，哪里一堆！死气沉沉！建议少晃动、移动！

• memory (2016-3-16 15:04:56)

  慢慢等一下吧
  只要没染菌，慢慢养着吧，就别老折腾它们了。
  

• 雪花子 (2016-3-16 15:05:14)

  QUOTE:

  原帖由 memory 于 2016-3-16 15:04 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  慢慢等一下吧
  只要没染菌，慢慢养着吧，就别老折腾它们了。
  

  好的吧  谢谢你
  就是很害怕它长不起来了

• SO2 (2016-3-16 15:05:30)

  首先确定你的培养条件没有问题，培养基里改加的都加了，培养基和血清都是合格的牌子和批次
  然后确定你拿来复苏的细胞没有问题
  再看看你的培养条件，二氧化碳还有吗，培养箱的水槽还有水吗，培养箱温度控制对不对，等等
  如果一切都没问题，那就慢慢养吧
  不需要换20%的

• woshituzhu (2016-3-16 15:05:48)

  嗯 的确是特别稀。 刚复苏的时候都不贴壁，就留下零星的一点细胞坚强的长着~   
  我不知道是不是我冻存的时候在4℃和-20℃放的时间太长了，分别都有1h吧，对细胞有影响了？之后是-80℃12h，然后转入液氮罐。
  冻存液是按细胞中心给的说明配的：常规培养液（含1%双抗）+20%FBS+8%DMSO。
  今天去看了一下，好像是长了点，但是仍然很慢

• 雪花子 (2016-3-16 15:06:24)

  QUOTE:

  原帖由 SO2 于 2016-3-16 15:05 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  首先确定你的培养条件没有问题，培养基里改加的都加了，培养基和血清都是合格的牌子和批次
  然后确定你拿来复苏的细胞没有问题
  再看看你的培养条件，二氧化碳还有吗，培养箱的水槽还有水吗，培养箱温度控制对不对，等等
  如果一切 ...

  培养条件跟之前养的时候一样，应该是没什么问题。听大家给分析的我觉得有可能的确是我没冻存好。
  请问您做的时候冻存步骤是怎样的？有哪些特别关键的细节需要注意？
  3Q~

• ero11 (2016-3-16 15:06:48)

  QUOTE:

  原帖由 woshituzhu 于 2016-3-16 15:05 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  嗯 的确是特别稀。 刚复苏的时候都不贴壁，就留下零星的一点细胞坚强的长着~   
  我不知道是不是我冻存的时候在4℃和-20℃放的时间太长了，分别都有1h吧，对细胞有影响了？之后是-80℃12h，然后转入液氮罐。
  冻存液是按细胞中心 ...

  我也不知道是不是这个过程，也可能是你复苏的过程，复苏的时候要快，冻的时候要慢。美国这边有一种盒子，里面装异丙醇，然后放-80度，就是匀速降温了。

• woshituzhu (2016-3-16 15:07:34)

  细胞冻存效果不好，大部分细胞不能复苏。少量细胞存活需要时间慢慢长起来，耐心等待吧。应该没有什么问题。
  至于冻存细胞，我这里非常简单：用含10% DMSO全血清冻存，也不需要逐步降温的复杂过程，就是把细胞放在特制的冻存盒或者泡沫盒内，扔到-80C冰箱了事。我的细胞从来不放在液氮中，都是存在-80C冰箱，短则三年五年，长则十年以上，好像都不存在问题。

• okhaha (2016-3-16 15:07:56)

  因为你的细胞太稀了，所以长的一团团的，这个长好了传下一代密度大些，我一般都是1:5。你冻存的时候估计没冻好，所以复苏不行，可以把两管放到一瓶复苏。
  
  ======================================================================================
  
  关于RAW264.7我之前培养的时候确实碰到这个问题，如果传代密度低的话，这个细胞的生长状态就不太好！

• 雪花子 (2016-3-16 15:08:27)

  细胞冻存效果不好，大部分细胞不能复苏。少量细胞存活需要时间慢慢长起来，耐心等待吧。应该没有什么问题。
  
  至于冻存细胞，我这里非常简单：用含10% DMSO全血清冻存，也不需要逐步降温的复杂过程，就是把细胞放在 ...
  
  ===============================================================================================================
  
  谢谢你，又给了我点儿信心~
  我现在也不知道是哪里出了问题，下次冻存的时候试试你的冻存液。不过没有什么特制的冻存盒，不知道您讲的是个什么样的盒子。直接放泡沫盒吧。

• 雪花子 (2016-3-16 15:10:12)

  QUOTE:

  原帖由 okhaha 于 2016-3-16 15:07 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  因为你的细胞太稀了，所以长的一团团的，这个长好了传下一代密度大些，我一般都是1:5。你冻存的时候估计没冻好，所以复苏不行，可以把两管放到一瓶复苏。
  
  ================================================================= ...

  原来大家也遇到过类似的问题，那我再等等吧，希望能长起来

• 雪花子 (2016-3-16 15:10:34)

  首先看看细胞密度，包括没有贴壁的，大概知道你冻存的时候是不是细胞密度太低。如果太低状态不好也正常，细胞生长有一定的密度，要不生长很慢。到最后细胞状态可能也不会太好。复苏大约五个小时以后就要看看细胞状态 ...
  
  ===========================================================================================================
  
  好的。谢谢建议，下次做的时候特别注意一下。
  因为这个细胞有时候特别不好消化，可能我上次冻存前消化的时间长了（至少3min），虽然细胞浓度挺高的但细胞状态可能已经不好了。
  细胞房那个就离心机转速有点不稳定了，是不是也有影响啊？会有机械损伤？
  复苏的洗两次，是要洗去DMSO吗？它的影响特别大吗？

• 雪花子 (2016-3-16 15:11:32)

  同意，前一阵子，我养的Raw 264.7的时候也遇到同样的问题，稀疏，生长缓慢，都想放弃了，于是有四五天没管他们，结果反而长满了。柳暗花明的感觉。...
  
  ===============================
  
  啊，希望我的也能这样绝处逢生~

• 1221 (2016-3-16 15:13:33)

  同意，前一阵子，我养的Raw 264.7的时候也遇到同样的问题，稀疏，生长缓慢，都想放弃了，于是有四五天没管他们，结果反而长满了。柳暗花明的感觉。...
  
  ============================================
  
  你好，请问能不能分一瓶RAW 264.7给我呢？谢谢啦
  

• 水母 (2016-3-16 15:14:36)

  嗯 的确是特别稀。 刚复苏的时候都不贴壁，就留下零星的一点细胞坚强的长着~   
  我不知道是不是我冻存的时候在4℃和-20℃放的时间太长了，分别都有1h吧，对细胞有影响了？之后是-80℃12h，然后转入液氮罐。
  冻存 ...
  
  ====================
  
  10%的血清就够了
  这个并不是越多越好的

• iii_ii (2016-3-16 15:15:37)

  很容易分化的，很难养。

• viviwang1987 (2016-3-16 15:15:54)

  
  
  请问你的问题解决了吗？我现在遇到了同样的问题细胞养不起来，而且还很容易长菌。