查看完整版本请点击这里:
[求助]pcr后跑电泳非特异性条带很多怎么办?
[求助]pcr后跑电泳非特异性条带很多怎么办?[求助]pcr后跑电泳非特异性条带很多怎么办?
pcr后跑电泳我要的条带很亮,但同时非特异性条带很多,提高退火温度后,也不能消除。请教各位我该如何处理?
查看完整版本请点击这里:
[求助]pcr后跑电泳非特异性条带很多怎么办?
[求助]pcr后跑电泳非特异性条带很多怎么办?
字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2011-10-22 16:53 作者: smile_smile 来源: 分析测试百科网
最新回复
菜鸟丙 (2011-10-22 16:54:34)
jude (2011-10-22 16:54:58)
smile_smile (2011-10-22 16:55:28)
#甜# (2011-10-22 16:56:21)
ha111 (2011-10-22 16:57:03)
阿拉蕾 (2011-10-22 16:57:34)
==============================================================================================================
首先要确定你酶切的目的,是继续做载体连接还是不继续做了,仅仅进行酶切与否的分型。
如果是前者,估计你的样本量应该不多,控制PCR的总量和特异条带的最高亮度的条件,然后进行切胶回收就可以了。
如果是后者,可能相对样本量多一些。都采用切胶回收的方法固然不现实,那我觉得你不妨先不要着急想去除干净非特异性的条带,要想两全其美,起始显示中是比较困难的。你可以尝试用你需要的酶进行酶切,看看酶切后的残余片断是否会由于非特异性扩增而有质的影响。往往,非特异性扩增产物不能被酶切,或者酶切后残余条带明显偏离你需要关注的范围,那样的话是不干扰你进行基因分型的。如果需要回收片断的话,这个时候进行切胶也不晚。
如果确实酶切后,杂带在分子量范围和亮度上都明显干扰目的条带的话,那非常不幸,你必须仔细摸索PCR条件了。
+田田+ (2011-10-22 16:57:52)
#黄药师# (2011-10-22 16:58:20)
smile_smile (2011-10-22 16:58:55)
SOS (2011-10-22 16:59:20)
长发piaopiao (2011-10-22 16:59:46)
[求助]pcr后跑电泳非特异性条带很多怎么办?