[求助]PCR怎么这么变化无常?

最新回复

• 椰子叶子 (2011-10-24 14:49:15)

  pcr就是这样
  人称魔鬼
  要做的很繁琐也很简单
  就是反复
  逐个换条件
  再，每次带一个以前做出来的作为对照
  就能知道是不是这次是整个体系出问题了，还是换模板的问题

• DDD (2011-10-24 14:49:39)

  我做了个模版梯度,果然又扩出来了,感觉一般的都是模版太多了.

• seven7 (2011-10-24 14:53:00)

  能否知道你模版梯度具体是怎样做的？

• wu11998866 (2011-10-24 14:55:06)

  模板换了是这样的．一般的说来，已成熟体系的模板浓度不要轻易改，但是换不同批次的样本时最好再摸一下条件．可能不同批次的样本提取ＤＮＡ的浓度不同．

• @STAR@ (2011-10-24 14:55:59)

  如果是总DNA建议先测浓度，这样模板多少就有保证，另外可以做两份，混和上样，这样一般可以得到好的照片，不会一会儿125没有，一会儿246没有。这颗是我师兄的经验。希望对你有用。

• wiwi (2011-10-24 14:57:18)

  大家怎么都出现这个问题了
  我的已经很长时间不出结果了
  郁闷至死
  
  以前我的模板出的条带像灯笼
  现在连一丝影子都没了
  简直莫名其妙
  
  我觉得模板没那么脆弱的
  可又找不出其他原因？

• 大桃子同学 (2011-10-24 14:57:42)

  有的时候是酶的问题。
  建议每次PCR都做阳性对照。

• 海鸥crazy (2011-10-24 14:58:12)

  我的也是阿，前天之前做的好得很，昨天和今天什么都没有，
  反应体系和条件什么都没有变，连用以前做出来的模板重新做了一次都是空白，
  郁闷阿！
  突发奇想是不是昨天开始天气冷了一点的原因阿，嘿嘿

• 豆荚 (2011-10-24 14:58:49)

  我的也是，所有的都换过了，酶、水，模版，引物，甚至不同的引物，条件，镁离子浓度。都不行。以前做得好好的，一下子就不行了。郁闷呀。镁离子的梯度也做过，不行。

• 菠萝菠萝蜜 (2011-10-24 14:59:07)

  如果什么都没有,整块胶上连影子都没有,建议反省一下点样点的怎么样,LORDING BUFFER加够没?有没有和样品混匀,要是这没搞好,样飘走了,PCR摸到死都不会出结果的.同样的实验条件,如果排除污染,实验不稳定,大多是做的还不够仔细.呵呵

• 韩梅梅 (2011-10-24 15:00:49)

  1要注意扩增子的污染，所以，一般建议，将所用的加样枪，还有tip，等等，用紫外线照射以便除去对于反应有干扰的核酸，还可以用稀盐酸浸泡。另外，建议，进行PCR分区，样品制备区，加样区，电泳分析区，尽量减少交叉污染。2 此外，还需要注意PCR反应中各种成分的量，其中我认为最关键的就是模板的质量和镁离子的浓度，所以，要想进行优化，首先要保证模板抽提没有问题，然后，最好进行梯度优化，以便确定最适的反应体系。

• 微笑的海豚 (2011-10-24 15:01:10)

  PCR是一项细致的活，应该保有相当的谨慎。如果你一边打游戏或聊天，一边做实验，也许你认为条件一致，可能试剂情况却不一样。而且现在实验室管理本身就是一个大问题。大家在一起做实验，用同样的试剂，难免会发生你所没有预料的事情，所以PCR出问题，不要武断的认为所有条件都一致。这样，不利于问题的发现和解决。

• 嗨皮 (2011-10-24 15:01:29)

  如果实验室的每个人的结果都这样，就要考虑试剂的问题了，
  如果不是，考虑一下自己的模板，浓度的问题吧，我以前也遇到过。

• 橘子水儿 (2011-10-24 15:01:51)

  我以前也是这样，我的感觉是摸板有问题，一般再重新做摸板剃度就会好些！
  每次换摸板，一定要做。

• 不懂 (2011-10-24 15:02:46)

  我以前也是这样，我的感觉是摸板有问题，一般再重新做摸板剃度就会好些！
  每次换摸板，一定要做。