[求助]变性PAGE电泳

最新回复

• 嗨皮 (2011-10-24 17:07:14)

  第二张

  
  40274235_snap.jpg

• 过路甲 (2011-10-24 17:07:49)

  你的图片很不清晰。但你说的条带呈现指甲尖状的情况我也遇到过，这是由于胶中的尿素析出造成的，你在上样前用注射器将孔好好吹一遍就可以了。

• 8princess8 (2011-10-24 17:08:28)

  不知楼主用的是什么电泳装置？跑测序胶的吗？

• 不请自来 (2011-10-24 17:09:16)

  是的，41*21的那种测序胶版
  问题我已解决了，是甲酰胺的原因

• PPT (2011-10-24 17:12:26)

  是的，41*21的那种测序胶版
  问题我已解决了，是甲酰胺的原因
  
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  甲酰胺？能解释一下吗？

• @STAR@ (2011-10-24 17:13:59)

  甲酰胺？能解释一下吗？
  
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  是啊！为什么是甲酰胺的问题呢？

• ##蒙奇奇 (2011-10-24 17:14:23)

  为此我也跑了好几块板子查找原因，先开始还以为是电压太高了或尿素质量不好等等原因，一一排查结果发现可能是Buffer的缘故吧
  因为先开始我用的是别人留下来得Loading buffer,时间大概有些久远了，可能跑低压电泳看不出有什么问题，但是测序胶板要求高压电泳，所以如果其中含有过多的离子的话就会影响DNA的泳动，前几天我重新用去离子甲酰胺配制了Loading buffer，结果就一切OK了 我的理解是这样的，欢迎指正
  只不过串样的问题还没有解决，不知那位高手能给予帮助？

• #甜# (2011-10-24 17:14:50)

  只不过串样的问题还没有解决，不知那位高手能给予帮助？
  
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  对于测序胶的鲨鱼齿梳子加样，我觉得首先应先固定好鲨鱼齿梳子在胶中的位置，其次没孔加样时注意不要贪心而加过量，这样就不会样品之间产生混样的情况了！这是我的一点经验，愿预你分享！

• 爬呀爬 (2011-10-24 17:15:20)

  Loading buffer:样品＝1：1
  你一般上样上多少μ l ，我上了10μ l （也就是PCR产物5μ l ，Loading buffer 5μl)，样品不是从上面冒出来的而是左右互串，好像齿面与玻璃板之间有缝隙似的，我把板子重新加紧结果还是串样，不知该如何解决？？
  谢谢！

• mogu (2011-10-24 17:16:05)

  如果你使用的是测序胶的鲨鱼齿梳子加样，在放置梳子时务必小心,要两边同时向下放,如果先放一侧再调另一侧时梳子就象个杠杆,发生松动,我从前遇见过这种情况,另外我认为你可以检查SPACER等各种造成夹子过松的因素!但最可能的原因是梳子已经发生了松动,偏离了原来的位置,造成样品间渗漏!好运!

• #甜# (2011-10-24 17:16:56)

  Loading buffer:样品＝1：1
  你一般上样上多少μ l ，我上了10μ l （也就是PCR产物5μ l ，Loading buffer 5μl)，样品不是从上面冒出来的而是左右互串，好像齿面与玻璃板之间有缝隙似的，我把板子重新加紧结果还是串样，不知该如何解决？？
  谢谢！
  
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  楼上战友的意见，您的spacer和鲨鱼齿梳子一定要配套，即厚度应该一致，否则鲨鱼齿梳子放入后仍会很松动，不只是因为您加样过程中可能触动梳子，还有因为电泳液的原因和PAGE胶有一定的“弹性”，也会造成梳子位置的上浮，即脱离孔底的胶面，要克服这一点，一定要注意1. spacer和鲨鱼齿梳子一定要配套 2. 制胶时梳子的平齿面一定要放置水平，待固胶后，鲨鱼齿梳子插入时一定要小心慢慢调整其为水平放入，使鲨鱼齿在同一平面且同时插入，否则会造成梳齿象跷跷板一样，在梳子与胶面之间留有空隙，这样，样品加入后会串孔，3. 您在加样的过程中尽量在孔中加样，千万不要触碰鲨鱼齿梳子，尤其在梳子与spacer不配套的情况下，多半会使鲨鱼齿梳子的位置发生移动，这样加样就前功尽弃了，以上是我多次失败的经验总结，希望您实验顺利！