【求助】请问如何消除引物二聚体？测序需要！

最新回复

• 911 (2016-4-04 22:07:11)

  
  我们也有这种情况，我们就在跑琼脂糖电泳的时候多跑一会，让二聚体的条带尽量跑在下面。不知道能不能满足你的要求。

• cbou876 (2016-4-04 22:07:30)

  
  尝试减少引物量，做个梯度，选取即能保证回收条带亮度，二聚体又最少。

• tie8 (2016-4-04 22:09:22)

  
  恩谢谢各位了，不过问题还是没有解决哦。

• one (2016-4-04 22:09:37)

  如果减少引物浓度还不行的话，估计只能重新换引物了吧。

• bring (2016-4-04 22:11:08)

  
  各加２％，４％，６％DMSO试试看，做三个梯度，通过增加特异性减少二聚体。

• daod (2016-4-04 22:11:52)

  首先我提个问题，为什么测序需要把引物二聚体去掉？
  我讲讲我们这边测序，一般两种情况：1.有非特异性条带，直接切胶回收目的条带，纯化后送去测序就可以了。2.只有单一的特异性条带，用cleanup试剂盒过柱纯化PCR产物就可以了，一般小于75bp的条带都能去掉。Takara的据说可以除去100bp以下的片段。这种情况不需要跑胶的，我觉得应该适合你。

• vvmmoy (2016-4-04 22:12:29)

  引物二聚体不影响你的测序，你的测序问题应该是其它的原因导致的，应该在别的地方招招原因。把你的胶回收之前的图看看！回收过程是否有污染，还有就是你的测序结果不理想到底是怎么样的不理想，最好截个图上来看看！
  费劲找取出二聚体的方法缘木求鱼，而且二聚体存在一般是不影响实验的！除非产物被引物二聚体所覆盖，其余情况与其无关！

• october7 (2016-4-04 22:12:45)

  
  750bp长度的PCR产物，扩增出来目的条带还可以，但是100bp下面有模糊的引物二聚体
  1,目的片段750，引物二聚体100，切胶回收对你的测序没有任何影响~~
  2.不知道拟所说的测序不理想是什么不理想，建议做个克隆之后再测序~~
  3，如果希望引物二聚体少点的话，你可以优化反应条件，引物二聚体过多是因为大量引物没有参与扩展，PCR效率太低的原因。可以考虑从退火温度和引物浓度入手做梯度优化~~~

• 101010 (2016-4-04 22:13:26)

  做二次ＰＣＲ，对消除引物二聚体效果不错．我试过．

• tuuu2 (2016-4-04 22:14:21)

  
  楼主可能是想要漂亮的图哦！
  呵呵！
  纯化纯化就可以了！

• pou (2016-4-04 22:15:36)

  
  同意楼上的看法。dimer在100bp以下，你的目的条带在750左右，两者距离远者呢。测序要么对，要么在不重要的bp上不符合，这两种结果都是可以接受的。最严重的就是测序错误。建议你搞清楚你所谓的“不理想”的结果是怎么不理想，会不会影响你下一步的实验，比如蛋白表达。如果不影响，就ok啊。如果你实在不待见它，我的想法是减少你的primer的用量。或者参考其他高手的方法吧。

• iii_ii (2016-4-04 22:16:11)

  
  降低引物浓度，如果还不行，那就是引物设计的不好。

• zhenxin (2016-4-04 22:17:33)

  
  一般调整引物和模板的比例，但也可能和引物设计有关。

• chengjie79 (2016-4-04 22:42:09)

  
  有就有啊，反正跑胶回收，不影响你实验。测序会有影响吗？应该不会有影响的，不过如果你连接是表达载体，测序的话是有可能有影响，有些公司有些序列他就是测不出。遇到这种情况，先连接t-vector,应该问题可以解决。不过也可能你的序列是复杂的2级结构，确实测不出。那么。。节哀。

• bgf5 (2016-4-04 22:42:44)

  
  PCR时热启动试试，消除引物二聚体挺好用的