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【转帖】我三年来关于AFLP的科研体会，服务大家
各位战友，如果你是奋战在AFLP的战场上，我想说的是无论何时你一定得战胜平时科研中得难以名状得痛苦，甚至是老师和同学不以理解得寂寞。【转帖】我三年来关于AFLP的科研体会，服务大家
AFLP的确是种技术难度很高得分子标记，从酶切到银染，步步艰辛。往往分子标记大家都觉得以PCR为基础，不至于太难，其实做出来AFLP，尤其是做出好的结果真不是件容易的事儿。
我曾经在研究生第一年没有任何结果，建立方法和平台都不知道从哪里下手，身边没有一个可以帮助我的人。我是强烈的推荐和感谢DXY，战友教会了我太多的东西，恨不得在毕业论文里致谢了。
我把我摸索出来的实验体系公布出来，献给帮助我成长的DXY：
1 DNA提取采用改进的CTAB法
2 限制性消化与接头连接
2..1酶切反应体系为：
DNA(100ng/μl) 2.5μl
MseI(12U/μl) 0.25μl
EcoRI (10u/μl) 0.25μl
Buffer 4μl
BSA 0.2μl
ddH2O 12.7μl
2.2 酶切反应条件为：
37℃酶切 3h
72℃ 10min
2.3 连接体系为：
酶切完成的DNA样品 5μl
MA(25μmol/L) 1.0μl
EA(5μmol/L) 0.5μl
ATP(10mmol/L) 0.25μl
T4 DNA连接酶(3U/μl) 0.15μl
Buffer 1.0μl
ddH2O 2.1μl
2.4 连接反应条件为：
16℃ 连接过夜
3 预扩增
3 1预扩增反应体系为：
连接完成的DNA样品 1.0μl
M00(50ng/μl) 0.6μl
E00(50ng/μl) 0.6μl
10×PCR Buffer 2.0μl
Taq酶(5U/μl) 0.2μl
dNTP(10m mol/L) 0.4μl
ddH2O 15.2μl
混合后加1滴石蜡油，进行预扩增。
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