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【求助】请问标本非要保存在液氮中么？
本人欲收集标本，打算做real time RT-PCR，请问取下来的标本必须保存在液氮中么？我们只有-80度冰箱，请问能保存多久？？看到有人说往标本里面加trizol能延长保存时间，有没有什么官方可以参考的？【求助】请问标本非要保存在液氮中么？
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【求助】请问标本非要保存在液氮中么？
【求助】请问标本非要保存在液氮中么？
字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2016-4-08 15:14 作者: minran_1980 来源: 分析测试百科网
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yjf1026 (2016-4-08 15:14:24)
1、标本采集是我们实验一个重要的前期工作，但是大多数（我想是绝大多数）研究人员（像楼主这样的研究生居多）对标本采集以及保藏的步骤及相关注意事项知之甚少：
标本收集的准备工作 ：术前办理相关手续，标本收集者首先对病人家属或病人行知情说明，并签署术中标本留取活检协议书，同时与临床科室、手术室密切联系，并由临床医生填写标本入库登记表，事先跟病理科医生协商，在组织标本足够大，能确保病理检查的前提下，切取少许组织进库保存，遇到小组织标本要果断放弃收集。
取材器材方面的准备 ：供存放标本的液氮罐，经灭菌的取材器材，照相机，已编号的灭菌储藏管，资料登记本，橡胶手套等。
冰冻组织标本的收集 ：在组织标本足够大，手术切下肿瘤组织后，主刀医生在无菌条件下将肿瘤组织用生理盐水冲洗两次后一分为二，3/4用于病理检查，1/4用于肿瘤库冻存。选取的标本包括肿瘤组织(避免取坏死组织并尽量冲洗尽血液)、 瘤旁组织和远端正常组织。标本的切取方法与时间控制：首先对大体标本进行观察和拍照，确认肿瘤的部位、范围，并与周围异己组织鉴别，进行相应的描述登记。在标本离体后应在最短时间内(<30 min) 更换器具切取包括肿瘤、瘤旁、正常组织组织标本，成直径约0.2 cm～0.5 cm的组织块，各取2块～4块，分别装入已编号的带有橡皮垫圈的灭菌冻存管中，旋紧盖子后放入液氮转移罐，防止冷冻后爆管。
标本的保存 ： 将液氮转移罐中的标本储藏管按次序转移入超低温冰箱相应位置保存 。标本实行分类分组保存，每一病种的每一例标本的肿瘤、瘤旁以及正常组织配组放同一位置。
2、超低温保藏技术 ：超低温保藏一般分为两种方式，一是超低温冰箱 保藏，保藏温度一般为-70℃～-80℃；另一种方式为液氮超低温 保藏，根据液氮罐的构造类型，可分为隔氮式和浸氮式，隔氮式是将保藏物保藏于气相中，保藏温度一般在-135℃左右，浸氮式是将保藏物保藏在液氮的液面之下，保藏温度为-196℃。
8princess8 (2016-4-08 15:15:25)
之所以要保存在液氮中为了保护RNA，RNA酶在液氮中活性会降为0，从而不能降解RNA以达到保护RNA的目的，而在-80℃，rna酶尚有活性，不能保存很长时间，不过你可以买RNA locker或fixer，先用这些试剂固定后可长久保存于-80℃，我们实验室就是这样保存的。而trizol有灭活rna酶的作用，会比直接冻存于-80℃时间要久，如果是细胞标本可以这样存储。组织标本就不知道效果如何了。用RNA locker或fixer冻存标本时，在冻存前要先用RNA locker或fixer浸泡24小时的，以渗透到组织内部，浸泡前组织要切成小块以使效果最佳化。trizol有没有这样的渗透性就不得而知了，再说trizol冻存太贵了。
daod (2016-4-08 15:15:42)
液氮可以保持大约6-8年，-80℃大约在3-5年吧。记得当初问过一个从德国回来的一个博士，大致是这个数字，记不太清楚了，不过可以肯定滴是，液氮保存时间肯定远远长于-80℃，适合建立标本库，为将来师兄弟留标本做实验那种。
PCR (2016-4-08 15:16:12)
标本收集的准备工作 ：术前办理相关手续，标本收集者首先对病人家属或病人行知情说明，并签署术中标本留取活检协议书，同时与临床科室、手术室密切联系，并由临床医生填写标本入库登记表，事先跟病理科医生协商，在组织标本足够大，能确保病理检查的前提下，切取少许组织进库保存，遇到小组织标本要果断放弃收集。
取材器材方面的准备 ：供存放标本的液氮罐，经灭菌的取材器材，照相机，已编号的灭菌储藏管，资料登记本，橡胶手套等。
冰冻组织标本的收集 ：在组织标本足够大，手术切下肿瘤组织后，主刀医生在无菌条件下将肿瘤组织用生理盐水冲洗两次后一分为二，3/4用于病理检查，1/4用于肿瘤库冻存。选取的标本包括肿瘤组织(避免取坏死组织并尽量冲洗尽血液)、 瘤旁组织和远端正常组织。标本的切取方法与时间控制：首先对大体标本进行观察和拍照，确认肿瘤的部位、范围，并与周围异己组织鉴别，进行相应的描述登记。在标本离体后应在最短时间内(<30 min) 更换器具切取包括肿瘤、瘤旁、正常组织组织标本，成直径约0.2 cm～0.5 cm的组织块，各取2块～4块，分别装入已编号的带有橡皮垫圈的灭菌冻存管中，旋紧盖子后放入液氮转移罐，防止冷冻后爆管。
标本的保存 ： 将液氮转移罐中的标本储藏管按次序转移入超低温冰箱相应位置保存 。标本实行分类分组保存，每一病种的每一例标本的肿瘤、瘤旁以及正常组织配组放同一位置。
2、超低温保藏技术 ：超低温保藏一般分为两种方式，一是超低温冰箱 保藏，保藏温度一般为-70℃～-80℃；另一种方式为液氮超低温 保藏，根据液氮罐的构造类型，可分为隔氮式和浸氮式，隔氮式是将保藏物保藏于气相中，保藏温度一般在-135℃左右，浸氮式是将保藏物保藏在液氮的液面之下，保藏温度为-196℃。
PCR (2016-4-08 15:16:36)
这要从这两种超低温保藏方法的 降温速率 解释：
液氮降温速率快，标本存入液氮中后可以快速降温，可以减少对新鲜细胞结构的损伤，降低被冷冻物的脱水及干耗损失；不经液氮或其他手段的快速冷冻，直接将标本放入超低温冰箱，由于其制冷特点，降温速率有限，在标本从室温降到超低温（-80度左右），需要的过程相对缓慢。我们知道水在4摄氏度时是热缩冷涨的（我们在日常生活中也会发现水结冰后体积是膨胀的），标本细胞内的水分将在缓慢冷冻过程中因膨胀而导致细胞壁破裂等使组织结构损伤，表面水分在温度较长时间的下降过程中蒸发而使标本脱水干燥，从而破坏标本本身。
INK (2016-4-08 15:16:50)
uaubc (2016-4-08 15:18:06)
在国内， -80度冰箱保存提取RNA的材料最好不要超过一个月，不然RNA会降解没了。
66+77 (2016-4-08 15:18:39)
这要从这两种超低温保藏方法的 降温速率解释：
液氮降温速率快，标本存入液氮中后可以快速降温，可以减少对新鲜细胞结构的损伤，降低被冷冻物的脱水及干耗损失；不经液氮或其他手段的快速冷冻，直接将标本放入超低温冰箱，由于其制冷特点，降温速率有限，在标本从室温降到超低温（-80度左右），需要的过程相对缓慢。我们知道水在4摄氏度时是热缩冷涨的（我们在日常生活中也会发现水结冰后体积是膨胀的），标本细胞内的水分将在缓慢冷冻过程中因膨胀而导致细胞壁破裂等使组织结构损伤，表面水分在温度较长时间的下降过程中蒸发而使标本脱水干燥，从而破坏标本本身。
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楼主不会这样问的！人家问的跟你回答的相差十万八千里
911 (2016-4-08 15:18:56)
之前冻过一批血样本，直接抗凝管冻存，3个月后提RNA，提到50ng左右的量。不过我做miRNA，跟你会有所差异，仅供参考。
boom (2016-4-08 15:19:09)
最佳方案还是组织取下的第一时间放入液氮（这个你可以借一下或者买一点，也不是很贵）中，冻住，然后再放到-80℃保存，不用一直放在液氮里面，这样组织之后提取的效率最高。
其它标本上面的站友说的是对的，加trizol处理细胞核血液还是不错的（血液最好能够分离一下血细胞，会更好），-80冻存就好。
注意一定要-70℃以上，否在RNA会降解。
u76mp (2016-4-08 15:19:25)
RNA later (ABI)处理后，-80度保存，组织要切小块，浸泡~提RNA，无论长短，10年都没问题。这是标本库的标准保存流程之一~~
555444 (2016-4-08 15:21:43)
QUOTE:
您好！如果方便的话，能否请您详细阐述一下“标本库的标准保存流程”？急求学习，谢谢！
65urh (2016-4-08 15:22:30)
其它标本上面的站友说的是对的，加trizol处理细胞核血液还是不错的（血液最好能够分离一下血细胞，会更好），-80冻存就好。
注意一定要-70℃以上，否在RNA会降解。
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您好，我有一批标本，是师兄们之前按照您说的方法，第一时间放进液氮中，然后转移入-80冰箱的。如果现在我想统计一下标本的数量和冻存管上的记录信息，那么请问我能从冰箱中拿出标本在室温下检查而不会对标本造成伤害的最长时间是多久呢？
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