【求助】细胞内药物的提取时，用质谱检测

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• mimima (2016-4-10 11:09:29)

  不知你分析的样品中离子物质浓度是多少？要是低于10ug/mL，对仪器影响不大。注意离子源的温度要高于色谱柱使用时设定的最高稳度，如果含量在1mg/mL，被分析物浓度较高，可采用分流进样，如果PEG浓度还高，被测物还低，建议改用其它方法，如PEG，其对离子源的污染还是比较厉害的，若只是偶尔分析一下，那就分析完了洗洗离子源。

• rrra6 (2016-4-10 11:09:49)

  恩，我要测的东西浓度很低，要测到1或0.5ng/ml,现在是把这个物质提出来的都很少。
  我很想知道在回收率很低的基础之上，怎样较少离子抑制？
  谢谢二介战友。。

• mimima (2016-4-10 11:10:08)

  4楼
  
  基质效应（matrix effect）：源于待测组分与生物样品中的基质成分在雾滴表面离子化过程中的竞争。由于基质中某些干扰组分的存在会使待测组分离子生成的速度同标准样品相比有显著不同，使得信号响应值产生较大变异。也有人认为基质效应是由于待测组分与基质中内源性物质共洗脱而引起的色谱柱超载所致，这些成分常因在色谱分析中与目标化合物分离不完全或未被检测到而进入质谱后产生基质效应。分为离子抑制和离子增强两种。有文献报道，基质效应主要对ESI离子化方式有显著影响。
  评价方法很简单，就是在做method validation时，分别制备回收率样品和基质效应样品，然后比较二者的峰面积，待测物与内标的分别计算。
  ME％=回收率样品峰面积/基质效应样品峰面积*100%
  85%-115%之间认为不存在基质效应。
  其中低、中、高浓度各6份，回收率样品就按照正常方法制备，基质效应样品就是把待测物和内标以流动相稀释到对应浓度即可。
  避免基质效应，一句话说来就是调整色谱保留时间。通常来说死时间的基质效应最严重且多为离子抑制，要尽量避免死时间出峰。当然，也不能说避开了死时间就万事大吉。在方法开发阶段，可以做一对回收率样品和基质效应样品在不同色谱条件下考察基质效应。尽量缩短保留时间提高通量，同时避免基质效应。
  也看文献说ESI源容易产生基质效应而APCI源较好，这个不太好说。
  另外，优化样品预处理方法也可以在一定程度上避免离子抑制，当然也不绝对，色谱条件选好了沉淀蛋白也能做一个好方法。

• 大大 (2016-4-10 11:10:28)

  在LC-MS的基质效应影响的评估中，可以比较实际样品和空白溶剂在Ｑ1　ＳＩＭ中的响应值。更加一个实际的方法是将被分析物的纯品加入空白基质和纯溶剂中，比较两者的信噪比。如果样品中被分析物浓度已知，则可将分析物加入纯溶剂中，使之达到与样品中分析物的浓度一样。如果样品中分析物浓度未知，或者是纯粹的无分析物的基质无法得到，则可用分析物的同位素内标分别加入到样品和纯溶剂中，比较二者响应差别。通常基质效应可用抑制系数衡量，绝大部分情况下降低信号响应，抑制系数＜1，少数情况下，也能增强响应信号，此时抑制系数＞1．

• 无怨无悔 (2016-4-10 11:10:52)

  具体的评价方法。
  基质效应的评价：一般是1）用流动相配制高中低三个浓度的待测物，并加入内标，测得响应值； 2）空白血浆提取后加入与1)相同浓度的待测物和内标，测响应值
  基质效应 ME%=相应值2/相应值1×100％
  这样，不同浓度的待测物的基质效应和内标的基质效应均可得到。
  如果是有机溶剂提取，则很简单，只要把准备作为1）组进样的溶液加到空白血浆提取吹干后的管子里，振荡离心一下进样就可以了，加入的体积就是复溶时的体积；
  如果时蛋白沉淀，则复杂一些。就是待测物和内标的混合物加入相同体积生物样品基质与其对比的基质后测相应值，前者的结果就是2，需把空白血浆按比例加入沉淀剂，离心后取上清加入即可；后者的结果就是1，只把空白血浆换成水再加入沉淀剂即可。
  一般基质效应最好做5－6份（当然越多越好，但是考虑到实际操作，5－6份比较现实）不同来源的空白基质，这样可以考查待测物在不同基质中的介质效应情况，如果介质效应在不同浓度，不同基质中基本一致，且不影响样品的测定，则个人认为有基质效应也没有关系，因为只要样品在标准曲线和样品中的基质效应一致，则用其定量也是可以的。如果不一致，则最好避免或者减轻基质效应。
  减轻基质效应的方法主要有：改变前处理方法；改善色谱条件（尽量把峰往后推，保留时间靠前，比较容易受基质效应的影响；如果有切换阀，最好把样品峰出峰前一分钟之前的都切换调）；改用APCI源（ESI源比较容易受基质效应影响）等。

• 今生如此 (2016-4-10 11:11:12)

  回收率问题，为什么一定要提取？就不可以直接沉淀原生质？离心取上清液？另外可以浓缩阿。离子抑制不是主要原因，也解决不了多大作用。可以根据你的酸碱性加点甲酸或醋酸铵