【求助】如何冲洗能彻底清除残留在柱子中的杂质

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• 今生如此 (2016-4-10 12:32:01)

  1. 以甲醇－水（95:5，V/V）、纯甲醇、一氯甲烷等为流动相，依次冲洗。每种流动相的冲洗体积应是20倍柱体积，然后，再以相反顺序依次冲洗。
  2. 除了加预柱外，可以用固相萃取预处理血样，原理与色谱柱相同，关于这方面论文较多。
  
  人血浆中阿西美辛及其代谢物吲哚美辛的固相萃取-HPLC-UV法测定

• danzi (2016-4-10 12:32:21)

  我的一点经验：
  1，我觉得最好的冲洗办法就是把你的流动相中的盐的比例换成水冲洗就可以了比如你的流动相的比例是盐：乙腈＝50：50，你就用水：乙腈＝50：50冲洗就好了。
  2，加预柱对于保护柱子肯定是个很好的方法，但是选择一个好的柱子也是一个很关键的问题，我以前用过一些柱子觉得压力升高很快，现在用的柱子也一样的用血样，但是没觉得柱子压力是个很大的问题。
  3，我不知道是不是我的个人感觉，我觉得固相萃取方法的重复性不是很好。

• daomei (2016-4-10 12:32:40)

  以甲醇－水（95:5，V/V）、纯甲醇、一氯甲烷等为流动相，依次冲洗。每种流动相的冲洗体积应是20倍柱体积，然后，再以相反顺序依次冲洗。这个方法效果还不错，我试过的。你可以加预柱，还可以加个流路过滤器。关键是你的样品要处理好，去除蛋白的方法要合适，溶剂萃取啊，效果可以。柱子实在不行了，就修补柱头，在考虑逆向反冲。其实我觉得加预柱就足够了，我们平时都这么用，柱子寿命还是比较长的。

• 大嘴猴 (2016-4-10 12:33:00)

  补充一点：如果流动相中用缓冲盐的话，首先要用纯水冲柱，冲洗体积要大于２０倍的柱体积．

• rrra6 (2016-4-10 12:33:28)

  建议用来冲洗的溶剂体积
  色谱柱尺寸 柱体积 所用溶剂的体积
  125-4 1.6ml 30ml
  250-4 3.2ml 60ml
  250-10 -20ml 400ml
  请根据下表选择您的再生方法：
  极性固定相（如Si，NH2*，DIOL基色谱填料）的再生：
  正庚烷→氯仿→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水**
  非极性固定相（如反相色谱填料RP－18，RP－8，CN等）的再生：
  水→乙腈→氯仿（或异丙醇）→乙腈→水
  0.05M稀硫酸可以用来清洗已污染的色谱柱