【分享】天然有机化合物提取分离与结构鉴定

最新回复

• p1900 (2016-4-12 10:26:21)

  想用内标法测定血浆中样品的含量，但对于相关标准曲线的标准曲线的制备方法不是很明白，我想用蛋白沉淀法处理血浆，是不是还要要氮气吹干，以及内标与血浆体积比为多少，希望做过的很明白的朋友指点一下 ，及相关的注意事项，谢谢

• qinqinai (2016-4-12 10:26:44)

  好好翻看下《体内药物分析》一书即可解惑

• PP熊 (2016-4-12 10:27:05)

  记得沉淀蛋白处理后是高速离心，取上清液进样，不过比较伤柱子,记得以前做生物等效性时一个药最起码用一根柱子。记得一般也就是用外标做的，萃取时才用内标。
  如果用萃取的就需要用氮气把溶剂吹干后用流动相溶解进样，固相萃取除外。

• 大嘴猴 (2016-4-12 10:27:28)

  沉淀蛋白，高速离心后取上清液进样，很容易赌柱子,柱压增高；用内标法可以消除提取方法中待测物因蛋白沉淀、溶剂稀释带来的误差。是否氮气吹干，取决于你待测物含量，如果比较高，可以不氮吹，氮吹后复溶主要是可以起到浓缩作用；内标与血浆体积以前在论坛见过，忘记了，我自己用的是1:15。希望有用！

• qinqinai (2016-4-12 10:27:49)

  此类样品通常必须用预柱，对柱子影响还是比较小的，要是液质联用，就不建议采用沉淀蛋白的方法。

• 钻石 (2016-4-12 10:28:10)

  你好 请问 为什么 不建议采用蛋白沉淀的方法呢 麻烦指点一下迷津谢谢

• 灵魂 (2016-4-12 10:28:33)

  蛋白沉淀处理样品比较脏，基质效应大
  做LCMS时容易造成响应高高低低，没有规律变动
  液液萃取等其他处理方法会干净点

• 双子座 (2016-4-12 10:29:00)

  我做过几年的液质联用的生物样品分析，药代动力学方面的，我们是给国外客户做的，90%的项目都是蛋白沉淀，一般用乙腈沉淀的话，乙腈和血样品的体积比至少2:1就可以，如果用甲醇，他的沉淀能力比乙腈差一些，要多用一点。是否需要氮气吹干，是取决于这个化合物的响应信号，响应高的话，沉淀离心后取上清后加一定比例的水或水和有机相的混合物复溶后进样。
  内标是直接配在沉淀用的有机溶剂如乙腈或甲醇里面的。
  
  一般LC/MS/MS，我们能做到1到1000ng/ml的线性范围是没有问题的（进样体积大概是10或20微升）
  
  标准曲线是用95%的血浆+20倍浓配的标准品来做的，如：各对照品浓度=190ul血浆+10ul 20倍的目标对照品浓度
  后续沉淀处理时和样品一样的，沉淀-离心-取上清-复溶-进样

• PP熊 (2016-4-12 10:29:21)

  如果lz是做普通的检测器，用长柱子，那么上述前处理的各种手段都要用上了
  
  做LC/MS/MS 用的都是3或5cm的柱子，时间短，柱子影响不大的

• mimima (2016-4-12 10:29:41)

  相对液液萃取或固相萃取，沉淀蛋白方法可能杂质最多，不过该方法成本低，操作方便。所以如果杂质不干扰分析，对于药动学研究那么多样品而言，其仍然是首选的处理方法。当然，现在也有些更方便的技术，比如柱切换或者在线萃取的。

• huali (2016-4-12 10:30:04)

  我是菜鸟，做内源性物质检测，我用UPLC-TOF-MS，看到下面，希望有用
  
  如果是大极性的就要用乙醚，异丙醇，如果是小极性的就用正己烷，环己烷；氯仿，二氯甲烷，乙酸乙酯适合于中等极性。
  乙醚易将血浆中的极性物质提出来，提取的样品比较脏；
  异丙醇起沉淀蛋白的作用；
  环几烷比较安全，对于极性小的药物效果比较好；
  乙酸乙酯对极性大及小的物质都有一定提取效率，一般首选用其提取作初步摸索；
  一般情况坚决不用氯仿、二氯甲烷，毒性大，又不容易吹干，做最后候选

• 冰激凌 (2016-4-12 10:30:29)

  二氯甲烷要比乙酸乙酯好吹。乙酸乙酯有部分水溶性，不加热很难吹干。乙醚似乎也是用来提取中等极性或弱极性物质吧。极性强的一般水溶性强，大多直接沉淀蛋白了。