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[]讨论帖梯度主峰后面出来一些杂峰是怎么产生的？
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分别换了五台液相，三根色谱柱。空白溶剂，都出现了主峰后面的杂质峰。
流动相后来更换了墨克的色谙纯，水是注射用水。
还是没有找到原因。请高手指教！
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字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2011-11-05 09:04 作者: 六个梦 来源: 分析测试百科网
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最新回复
wood533 (2011-11-05 09:05:03)
后面的是梯度峰？梯度的话，我建议水相用屈臣氏水，不过滤，如果有盐，尽量用色谱纯
木槿 (2011-11-05 09:05:58)
当进行空白梯度实验的时候，尤其是使用短波长UV检测和高灵敏度设置时，上述情况较容易出现
通常是由于流动相和设备相关的疏水性以及UV吸收的杂质所引起的，而且流动相更容易出现问题，比如水，溶液，或添加剂等
一般先查污染源，比如先用纯水平衡系统，然后运行空白梯度，比如15min，然后再平衡几分钟，再重复空白梯度，如果第一运行中，峰较大，可能是水污染，如果与第二空白运行间无差异，可能是溶液问题，比如有机溶剂的问题
还有就是流动相添加剂，就是缓冲盐等，他们的可能污染可通过重复不含添加剂的空白梯度来检测。当鉴别出流动相溶剂或组分被污染后，应该用其他厂家或是干净的试剂来代替原来的试剂
当然如果上述情况未查找到污染源，那就可能来源于HPLC系统本身了，从你描述的情况看，第一种的可能性较大
@STAR@ (2011-11-05 09:06:39)
刘白白 (2011-11-05 09:11:29)
走梯度时试过只用水和流动相（不含盐），走空针，但后面也有杂质峰出现。
仪器因为是五台不同型 号不同厂家的，都出现这种问题，所以现在最怀疑的是水是不是有问题了，今天买了曲臣氏的水，把柱子好好冲一下，明天早上进空白看一下。
有进展再告诉大家，也希望大家能多提些想法，我来试一下。多谢了！
刘白白 (2011-11-05 09:11:29)
走梯度时试过只用水和流动相（不含盐），走空针，但后面也有杂质峰出现。
仪器因为是五台不同型 号不同厂家的，都出现这种问题，所以现在最怀疑的是水是不是有问题了，今天买了曲臣氏的水，把柱子好好冲一下，明天早上进空白看一下。
有进展再告诉大家，也希望大家能多提些想法，我来试一下。多谢了！
云端ing (2011-11-05 09:17:07)
六个梦 (2011-11-05 09:17:42)
水用的超纯水，盐用的是HPLC级别的，是拉尔法的。
其它试剂用的是墨克的。
方法是EP的。
液相是岛津2010A 和安捷伦1200、1260。
还能有什么问题呢，怎么就走不出来人家的峰呢？
EP的系统适用性图谱
93003613.png
@STAR@ (2011-11-05 09:18:36)
QUOTE:
这样看来，清洗一下系统试试看另外，色谱柱也一个不容忽视的环节
101010 (2011-11-05 09:18:59)
00无名指00 (2011-11-05 09:19:36)
1，仪器问题：最有可能的就是系统污染，尤其是管路，比如，入口单向阀或各接口处等有盐残留；
2，色谱柱问题：这个好办，换新的色谱柱，大部分能解决问题；
3，试剂试药问题：所用试剂、试药达不到色谱级别所需，或者不同批号不同厂家的东西都有可能影响，最直接影响的就是物质的纯度影响流动相的吸收；
4，梯度洗脱程序：梯度洗脱程序设置不合理，比如在某个时间段急剧变化；
5，其他：如配制方法不同，超声方法不同等。
如今，看似很简单的问题，在经过很长一段时间的摸索后发现，上述原因其实都是比较客观的，如果以上4点都解决不了，可以考虑以下原因：仪器本身功能上的区别导致。比如安捷伦低压梯度和高压梯度做的同样的东西，能重复出来，而且梯度峰都很小，甚至没有，而用岛津的低压和高压梯度仪器，所表现的就不一样了，具体原因，因只具有经验所得，所以目前只能作为讨论的一个话题，仅供各位参考，待日后确认后再与大家分享，也请有此方面的专家提供参考信息，欢迎各位积极参与，共同研究探讨到底是什么原因导致同样的条件梯度峰差异如此之大。
阿k (2011-11-05 09:23:34)
六个梦 (2011-11-05 09:24:05)
谢谢各位！
131415 (2011-11-05 09:24:26)
windy+++ (2011-11-05 09:25:04)
还有，是不是不同品牌的液相，那个峰与主峰的距离有所不同？如果是的话，更能印证是梯度本身所产生的，与其他因素没有关系。我曾经遇到过这个问题，在waters、agilent都像楼主似的，waters的对主峰有干扰，Agilent的刚好能完全分开，微调了一下梯度，就都能完全分开了。楼主可以试试。。
mamamiya (2011-11-05 09:25:49)
1，仪器问题：最有可能的就是系统污染，尤其是管路，比如，入口单向阀或各接口处等有盐残留；
2，色谱柱问题：这个好办，换新的色谱柱，大部分能解决问题；
3，试剂试药问题：所用试剂、试药达不到色谱级别所需，或者不同批号不同厂家的东西都有可能影响，最直接影响的就是物质的纯度影响流动相的吸收；
4，梯度洗脱程序：梯度洗脱程序设置不合理，比如在某个时间段急剧变化；
5，其他：如配制方法不同，超声方法不同等。
如今，看似很简单的问题，在经过很长一段时间的摸索后发现，上述原因其实都是比较客观的，如果以上4点都解决不了，可以考虑以下原因：仪器本身功能上的区别导致。比如安捷伦低压梯度和高压梯度做的同样的东西，能重复出来，而且梯度峰都很小，甚至没有，而用岛津的低压和高压梯度仪器，所表现的就不一样了，具体原因，因只具有经验所得，所以目前只能作为讨论的一个话题，仅供各位参考，待日后确认后再与大家分享，也请有此方面的专家提供参考信息，欢迎各位积极参与，共同研究探讨到底是什么原因导致同样的条件梯度峰差异如此之大。
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我们也出现和楼主一样的情况 我们也是试过n多条件排除 也可以说是没辙了
1. 仪器问题：我们新买台液相Agilent 1260
2. 色谱柱问题：柱子也是新买的 waters symmetry C18
3，试剂试药问题：甲醇、乙腈都是Merck的，也换过Fisher的；水换过娃哈哈水，屈臣氏，乐百氏、超纯水，重蒸水；所用缓冲盐也是进口的色谱级的；不过调pH值的磷酸是分析纯的，但是试过不加磷酸，不加缓冲盐，只有水和乙腈走梯度，也是出类似的梯度峰。
4，梯度洗脱程序：此梯度是EP7.1上
5，其他：其它我不很明白您的意思
我们也换过不同液相 不同柱子 至今也没解决
紫烟 (2011-11-05 09:26:08)
ELSEVER
ghost peaks in reversed-phase gradient HPLC: a review and update
sturat williams
可以查来看看
33号 (2011-11-05 09:28:09)
33号 (2011-11-05 09:28:34)
六个梦 (2011-11-05 09:29:19)
最后什么条件都试过了，液相用了waters的高压泵，但还好些，也不理想。
分析原因，因为出异常峰的时间正好是有机相和水相比例是50：50的时候，所以觉得是这个比例的粘度最大，而梯度比例变化最快，所以会产生这个峰，只是方法问题。后来改变了一下比例，把梯度变化稍慢些。现在做出来的色谱图很不错了。只是杂质的出峰时间有点变化，但都检出。
就是这样，仅供参考！谢谢各位！
#问号# (2011-11-05 09:29:58)
最后什么条件都试过了，液相用了waters的高压泵，但还好些，也不理想。
分析原因，因为出异常峰的时间正好是有机相和水相比例是50：50的时候，所以觉得是这个比例的粘度最大，而梯度比例变化最快，所以会产生这个峰，只是方法问题。后来改变了一下比例，把梯度变化稍慢些。现在做出来的色谱图很不错了。只是杂质的出峰时间有点变化，但都检出。
就是这样，仅供参考！谢谢各位！
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50/50的时候好像不是最大
但是原因估计就是那么回事了
谢谢
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